利用分枝杆菌等微生物转化植物甾醇生产甾体医药中间体9α-羟基雄烯二酮(9α-OH-AD)是当下甾体医药工业体系的一条重要工艺路线。本文以Mycobacterium sp.BFZ304作为实验菌株,以植物甾醇为底物,通过摇瓶发酵研究了不同碳源、氮源、磷酸盐等培养基成分、不同培养条件以及添加促溶剂对Mycobacterium sp.BFZ304转化植物甾醇生产9α-羟基雄烯二酮的影响。最终获得了收率大大提高了的9α-羟基雄烯二酮的产率。首先对培养基成分进行单因素实验,筛选出最优碳氮源以及磷酸盐等培养基各个成分,在单因素实验的基础上,以9α-轻基雄烯二酮的产量为衡量指标,采用响应面法优化了转化培养基的组成,并建立了玉米浆、葡萄糖、硝酸钠、磷酸氢二铵变化的二次回归方程,探讨了各因素对9oα-羟基雄烯二酮产量的影响。最终确定最适宜的转化培养基为葡萄糖1Og/L、玉米浆40g/L、硝酸钠6g/L、磷酸氢二铵0.7g/L。随后利用最优培养基对发酵转化条件如初始pH,接种量,摇瓶装液量,培养温度等进行筛选,优化结果如下:灭菌前调pH为7.0,以4%的接种量接种,转速为150rpm时,装液量为50mL,培养温度为30℃。然后利用优化好的培养基成分和转化条件对菌株转化能力进行验证,在此条件下的结果为:底物植物甾醇添加量为1Og/L时,9α-羟基雄烯二酮的产量可达到4.86g/L,底物植物甾醇的转化率为80%,提高了近40%。在此前优化实验的基础上,本研究还对本工艺进行了进一步的优化探索,特别是促进剂的添加,大大提高了底物转化率,高达到95%。