【摘 要】
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花生是我国重要的食用豆类作物。在石灰质土壤上栽培花生经常受到缺铁胁迫,表现出现叶片缺铁黄化病,影响其产量和品质。因此了解花生缺铁响应机制具有重要意义。前期对花生转录组数据研究发现,花生b HLH转录因子Ah PYE（POPEYE,又称Ahb HLH47）可能参与对缺铁的调控,但对于其分子机制尚不清楚。本研究在克隆花生Ah PYE基因的基础上,构建花生c DNA文库,通过酵母双杂交系统筛选与Ah P
【基金项目】
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安徽省自然科学基金面上项目（2108085MC83）； 安徽省高等学校自然科学研究基金重大项目（KJ2020ZD83）；
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花生是我国重要的食用豆类作物。在石灰质土壤上栽培花生经常受到缺铁胁迫,表现出现叶片缺铁黄化病,影响其产量和品质。因此了解花生缺铁响应机制具有重要意义。前期对花生转录组数据研究发现,花生b HLH转录因子Ah PYE（POPEYE,又称Ahb HLH47）可能参与对缺铁的调控,但对于其分子机制尚不清楚。本研究在克隆花生Ah PYE基因的基础上,构建花生c DNA文库,通过酵母双杂交系统筛选与Ah PYE互作的蛋白,并通过酵母双杂交和双分子荧光互补技术验证了花生Ah PYE与Ah ILR3和Ahb HLH115的互作。主要结果如下:系统进化分析表明,花生AhPYE、AhILR3和AhbHLH115基因分别与拟南芥AtPYE、AtILR3和AtbHLH115基因亲缘关系相近,推测AhPYE与AtPYE、AhILR3与AtILR3、AhbHLH115与Atb HLH115可能具有相似的功能。对重组质粒pGBKT7-AhPYE进行自激活和毒性检测,结果发现p GBKT7-Ah PYE对酵母细胞没有毒性,并且对报告基因也无自激活活性。成功构建出花生cDNA文库,文库总克隆数为1.03×10~7cfu,插入片段重组率为95.8%,基因长度总体在300-3000 bp之间,说明构建的花生cDNA文库质量高,且插入的基因片段具有良好的完整性。将文库质粒和pGBKT7-AhPYE共转化酵母细胞,筛选出包括Ah ILR3（Ahb HLH105）在内的22个可能与AhPYE互作的蛋白质。这些蛋白质涉及植物发育,环境胁迫等过程。推测Ah PYE可能与这些蛋白互作,在不同的生理过程中发挥作用。从花生中克隆出AhbHLH115和AhILR3基因的编码区序列,并通过酵母双杂交和双分子荧光互补实验进行互作验证。结果表明,花生AhPYE与AhbHLH115和AhILR3之间存在相互作用。综上所述,本文研究结果证明,AhPYE可能与AhbHLH115或Ah ILR3形成异二聚体,在维持花生铁稳态的过程中发挥重要的调控作用。
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