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目的:本研究的目的是建立对奥沙利铂耐药的CT-26-R、SW-480-R细胞系,通过蛋白质印记技术测定两种耐药细胞株中的P-pg蛋白、E-cadherin蛋白及TNF-a的含量,分析三者之间的关系,初步探究其耐药机制,为后续研究提供理论依据及耐药细胞系模型。方法:采用低浓度长时间接触法建立奥沙利铂耐药细胞系CT-26-R、SW-480-R。两种细胞系建立后采用CCK-8法检测两种细胞的耐药性,绘制两种细胞的生长曲线,最后采用蛋白质印迹法检测两种耐药细胞中TNF-a、P-pg、E-cadherin含量。结果:经过6个月的时间最终获得了生长良好的、能耐受250.38μg/mL OXP的耐药细胞CT-26-R细胞系以及耐受103.3ug/mlOXP的SW-480-R细胞系。两种细胞的生长曲线如图,可见CT-26-R的细胞生长较CT-26细胞明显缓慢,CT-26-R细胞的TD为52.8h,CT-26细胞的TD则为33.6h,CT-26-R细胞的TD是CT-26细胞TD的1.57倍。SW-480-R细胞系的TD为50.4h,SW-480细胞的TD为48.1h,SW-480细胞的TD是SW-480-R细胞TD的1.25倍。两耐药细胞株均表现出了生长变缓的现象。CCK-8法检测细胞活性可发现,CT-26-R、SW-480-R细胞的对奥沙利铂的耐受性明显高于CT-26、SW-480细胞,两种耐药细胞系成功建立,并且通过冻存后可以成功复活,可以为日后的实验提供稳定的耐药细胞模型。蛋白印记法检测sw-480及sw-480-R两种细胞系内E-cadherin蛋白含量时,可见E-cadherin蛋白在奥沙利铂耐药的SW-480-R细胞中明显低于不耐药的SW-480细胞,差异有统计学意义(p<0.05),而P-pg蛋白及TNF-a因子在耐药的SW-480-R细胞中则较SW-480细胞明显升高,差异有统计学意义(p<0.05);相似及结果也出现在CT-26及CT-26-R细胞系间,奥沙利铂耐药的CT-26-R细胞中E-cadherin蛋白较不耐药的CT-26细胞明显降低,差异有统计学意义(p<0.05),而P-pg蛋白及TNF-a因子在耐药的CT-26-R细胞中则较CT-26细胞明显升高,差异有统计学意义(p<0.05)。结论:本次实验成功建立奥沙利铂耐药的CT-26-R和SW-480-R细胞系,其中两种耐药细胞系中的TNF-a、P-pg含量均有不同程度的增高,E-cadherin蛋白含量降低,预示着EMT过程增强,P-pg蛋白、TNF-a的表达增强和肿瘤细胞发生耐药之间存在一定相关性。本次实验建立的两种细胞系可以作为其他类似研究的细胞模型。