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目的:观察DNA-PKcs在辐射旁效应中对细胞的影响,探讨DNA-PKcs参与调控辐射诱导细胞旁效应的机制。方法:采用人神经胶质瘤细胞M059K和M059J、人宫颈癌细胞Hela,M059K和Hela细胞为DNA-PKcs表达正常细胞,M059J细胞为DNA-PKcs活性缺失细胞,用DNA-PKcs抑制剂NU7026处理Hela细胞,实验每种细胞分为正常组、辐照组、旁效应组,辐照剂量为2Gy,在2Gyγ辐照后1h构建刺激液模式作为旁效应组。通过细胞生长曲线实验检测DNA-PKcs在辐射旁效应中对细胞生长的影响;细胞克隆形成实验观察DNA-PKcs在辐射旁效应中对细胞增殖的影响;微核试验检测DNA-PKcs在辐射旁效应中对DNA损伤的影响;DCFH-DA法观察DNA-PKcs在辐射旁效应中对活性氧(ROS)含量的影响;流式细胞仪检测DNA-PKcs对细胞周期的影响;Western Blot检测DNA损伤修复蛋白γH2AX、53BP1和CHK2-pT68的表达。结果:1.使用2Gyγ辐照后细胞出现细胞生长缓慢;细胞克隆形成明显减少(P<0.05);细胞内微核产生明显增多(P<0.05);细胞内ROS含量明显升高(P<0.05);流式细胞仪检测细胞周期显示细胞出现不同程度的G2/M期阻滞;Western Blot结果显示细胞内γH2AX、53BP1、CHK2-pT68表达升高。2.辐射旁效应可以导致细胞生长缓慢;细胞克隆形成减少(P<0.05);细胞内微核产生明显增多(P<0.05);细胞内ROS含量明显升高(P<0.05);流式细胞仪检测细胞周期显示细胞出现不同程度的G2/M期阻滞;DNA损伤修复蛋白γH2AX、53BP1、CHK2-pT68表达升高等。3.在DNA-PKcs缺失或失活的情况下,细胞在辐射旁效应中的损伤更为明显,细胞克隆形成减少;细胞内微核产生增多(P<0.05);细胞内ROS含量产生明显增多(P<0.05);细胞周期阻滞出现明显延长;DNA损伤修复蛋白53BP1表达升高,γH2AX、CHK2-pT68表达减少。结论:1.辐射旁效应能导致效应细胞活力降低;微核产生增多;细胞内ROS含量升高;细胞周期发生G2/M期阻滞;DNA损伤修复蛋白γH2AX、53BP1、CHK2-pT68表达升高。2.在DNA-PKcs缺失或失活的情况下,旁效应组细胞内微核率明显升高,DNA损伤修复蛋白γH2AX、CHK2-pT68表达减少,53BP1蛋白表达增多,细胞受到的辐射旁效应损伤更为严重。3.DNA-PKcs通过调控ROS、细胞周期和DNA修复蛋白γH2AX、CHK2-pT68表达来参与辐射旁效应。