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胰蛋白酶是一种重要的丝氨酸蛋白酶，能专一性水解精氨酸和赖氨酸羧基形成的肽键，将大分子蛋白降解成较小的片段，在临床、皮革工业、食品加工等诸多领域有着广泛应用，此外，还常被用作酶学动力学模型来研究底物催化机理。目前应用最广的为牛、猪等哺乳动物来源的胰蛋白酶，关于灰色链霉菌来源胰蛋白酶的研究也较为深入。链霉菌胰蛋白酶与哺乳动物胰蛋白酶相比，成分相对单一，作用温和，生产过程易于控制，且纯化工艺简单，因此受到越来越多研究者的关注。为解决灰色链霉菌野生菌分泌产物复杂、酶活低等问题，我们选取了变铅青链霉菌和枯草芽孢杆菌为宿主，尝试了灰色链霉菌胰蛋白酶异源表达的研究，其主要研究内容如下：以Streptomyces griseus ATCC10137基因组为模板，克隆得到胰蛋白酶编码基因sprT，连接大肠杆菌-链霉菌穿梭质粒载体pIJ86，转化变铅青链霉菌TK24，成功构建了重组链霉菌工程菌TK24/pIJ86-sprT。以R2YE为种子培养基，200r/min，30oC摇床培养24h，以5%接种量转接链霉菌发酵培养基XSH，在发酵第9d得到最高酶活3.56U/mL。为进一步提高产量，本研究比较了五种链霉菌常用培养基（R2YE, SELF, C5, TSB,XSH），结果表明以R2YE和SELF为发酵培养基时酶活最高，分别为9.21U/mL和8.61U/mL。本研究基于纯化的重组链霉菌胰蛋白酶（rSGT），对其酶活性质进行了系统的研究，酶学性质分析表明，和牛胰蛋白酶（BT）相比，重组链霉菌胰蛋白酶（rSGT）的耐酸能力强，具有较广的pH；且rSGT对酰胺键具有更高的特异性；此外，Zn2+和有机溶剂分别对rSGT的酯酶活力和酰胺酶活力具有促进作用。分别选用Bacillus subtilis的4种启动子和8种信号肽，研究了灰色链霉菌胰蛋白酶成熟酶基因mt在枯草芽孢杆菌中的表达情况，结果并没有在枯草芽孢杆菌中实现活性表达，仅在重组工程菌B. subtilis WB600/pP43-sacB-mt、B. subtilis WB700/pP43-sacB-mt和B. subtilis WB700/pP43-oSD-sacB-omt中获得大量的明显包涵体。