月季未成熟胚农杆菌转化因子的优化

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为了解决月季遗传转化的关键步骤——再生体系的建立,以‘漂多斯’、‘蓝丝带’、‘索奴拉’3个月季品种的未成熟胚为材料,研究了月季再生芽诱导和伸长的条件。结果表明,3个品种都能够在适宜的培养基上通过直接器官发生途径诱导出再生芽,并且ZT单独使用或较高浓度的ZT与较低浓度的NAA结合使用更有利于再生芽的诱导。‘漂多斯’在MS+ZT0.5mg·L-1培养基上再生芽诱导率最高,为33.3%;‘蓝丝带’在MS+ZT4.0mg·L-1+NAA1.0mg·L-1培养基上再生芽诱导率最高,也为33.3%;‘索奴拉’在MS+ZT0.5mg·L-1+NAA0.5mg·L-1培养基上再生芽诱导率最高,为16.7%。再生芽在MS+ZT0.5mg·L-1培养基上以及不含植物生长调节剂的MS基本培养上能够伸长得到具茎和叶的再生植株,而MS基本培养基更有利于再生芽伸长。以未成熟胚为外植体诱导再生芽时,月季果实的贮藏时间不宜超过90d。 为了优化农杆菌介导的月季遗传转化体系,以月季未成熟胚为受体,研究了Kan浓度、培养基、预培养时间、脱菌抗生素种类,光照条件和在共培养培养基中添加AS对遗传转化的影响。结果表明,50mg·L-1Kan选择压浓度即可抑制非转化再生芽的诱导;遗传转化适宜的培养基为MS+ZT0.5mg·L-1+NAA0.5mg·L-1;外植体在侵染之前宜预培养3d;选择培养基中使用脱菌抗生素Carb比Cef好;共培养时16h光照培养比暗培养有利于转化外植体的生长;共培养培养基中添加AS能够提高转化率。
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