论文部分内容阅读
鸡传染性支气管炎(Infectious bronchitis,IB)是一种在鸡群传播较快的呼吸道疾病,导致产蛋鸡群生长性能和鸡蛋品质下降等情况。该病病原——鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)的套叠式复制方式使得其基因型、血清型众多且仍处于不断增加的趋势。这就意味着,商品化疫苗株常常无法对地方性流行的IB提供有效的免疫保护。因此,根据地方流行毒株来筛选疫苗株或疫苗候选株,成为地方范围内防控IB的重要方向。本研究通过对某地区流行的5株IBV毒株进行血清交叉中和试验以及S1基因测序与对比分析,对该地区流行毒株进行血清分型和基因分型,并筛选出优势毒株,对研制区域性IB疫苗具有重要的参考价值。方法:本实验首先用18～20胚龄的气管环组织作为培养系统,对5株IBV地方分离株(JHL毒株、XPX毒株、SM毒株、ZDZ毒株、DJ毒株)进行气管环半数感染量(TOC-ID50)的测定;其次,制备出各个毒株的阳性血清,采用固定病毒-稀释血清的方法,在气管环组织培养物上进行血清交叉中和试验,用于血清分型;再次,对此5株IBV毒株S1基因进行序列测定与分析比较,用于基因分型;最后根据分型结果筛选出优势毒株,并通过动物回归试验进行免疫保护效果的验证。结果:(1)JHL、XPX、SM、ZDZ、DJ 毒株的 TOC-ID50 分别为1 0-6/ml、10-6.71/ml、10-5.10/ml、10-5.5/ml、10-5.72/ml;(2)血清交叉中和试验结果显示,JHL与XPX、SM、DJ、ZDZ毒株的抗原相关系数分别是 26%、55%、50%、34%,XPX 与 SM、DJ、ZDZ 毒株的抗原相关系数分别是42%、68%、38%,SM与DJ、ZDZ毒株的抗原相关系数分别是45%、47%,DJ与ZDZ毒株的抗原相关系数是52%;5个毒株之间的抗原相关系数范围在26%至68%,最高为DJ与XPX的68%,但没有高于80%,结果表明5个毒株存在着抗原相关性,属于相同血清型的不同亚型。(3)S1基因测序分析及基因分型结果显示,5个IBV毒株的S1基因序列均存在不同程度的碱基突变和缺失,经过建树分析可知,JHL毒株、XPX毒株及DJ毒株属于QX型毒株;SM分离株属于4/91分群中的毒株;ZDZ分离株属于Mass型分离株。(4)优势毒株筛选和动物回归试验结果显示,通过几个毒株间血清型和基因型相互关系的对比,选择DJ这个毒株来免疫动物进行攻毒保护试验;未免疫组鸡群在攻毒后出现精神沉郁,剖检肾脏出现尿酸盐沉积,免疫组攻毒后未出现明显临床症状与病变。血凝抑制(HI)试验结果显示,免疫组鸡只攻毒后第2周血清效价在3.4log2～3.9log2之间,第2～5周其血清效价逐步上升,第5周血清效价在5.7log2～6.5log2之间。未免疫组鸡只在攻毒4周后的血清效价在3.6log2～4.4log2之间,此后有开始上升的趋势。相比于未免疫组,免疫组鸡只在攻毒后的血清抗体产生时间较早,且效价较高,结果表明,使用DJ毒株进行免疫接种可以对其它4个分离株起到较好的临床保护作用。结论:JHL、XPX、SM、ZDZ及DJ 5株分离株均为同种血清型不同亚型;JHL毒株、XPX毒株及DJ毒株这三个分离株基因型为QX型;SM毒株与4/91型;ZDZ毒株为Mass型;DJ毒株为本实验中的优势毒株。