目的:类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis, RA)是一种以慢性进行性关节病变为主的全身性自身免疫病,未经正确治疗的RA可反复迁延多年,最终导致关节畸形及功能丧失。其病理的显著特点是滑膜的血管增生和炎性细胞侵润,后者则进一步导致滑膜、软骨乃至软骨下骨组织的破坏,并可有多系统受累。类风湿关节炎的病因及发病机制至今尚未完全阐明,细胞因子如TNF-α、IL-1等在RA中的致病作用已在大量的研究中得到证实,目前,对于RA的治疗,国内外尚无理想药物。传统抗风湿药物毒副作用较大,疗效差且疗程长,而生物制剂价格昂贵,还不能被普遍应用。因此,寻找一种新的治疗药物或治疗方法尤为重要。最新研究表明自由基在类风湿关节炎的发生及发展过程中具有相当重要的地位,并可能成为类风湿治疗的新靶点。依达拉奉(edaravone, MCI-186)是一种新型的自由基清除剂。目前主要应用于脑缺血的治疗,其通过清除自由基治疗RA的研究报道很少。本课题以鸡Ⅱ型胶原(chicken collagen type, CCⅡ)诱导的类风湿关节炎大鼠模型为基础,从关节肿胀度、血浆丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活力的变化和核因子κB ( nuclear factor-κB, NF-κB )、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha, TNF-α)在胶原诱导的关节炎(CIA)大鼠关节滑膜中的表达水平几个方面,观察依达拉奉对CIA大鼠的影响,评价其疗效,探讨依达拉奉与MDA、SOD、NF-κB、TNF-α之间的相关性及依达拉奉治疗CIA的机制和临床应用价值。方法:(1)选用30只成年雄性Wistar大鼠,随机分成5组,每组6只,分别命名为Ⅰ～Ⅴ组,其中Ⅰ组为正常对照组,Ⅱ组为模型对照组,Ⅲ组为依达拉奉低剂量组,Ⅳ组为依达拉奉高剂量组,Ⅴ组为氯诺昔康组。Ⅱ～Ⅴ组每只大鼠已给予尾根部皮内注射CCⅡ与完全弗氏佐剂(CFA)混合乳剂,成功制作鸡Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠模型。(2)于造模致炎后第18天开始Ⅲ～Ⅳ组分别给予依达拉奉3.0 mg/kg 2/日、6.0 mg/kg 2/日腹腔内注射治疗,Ⅴ组给予氯诺昔康4mg/kg.d腹腔内注射治疗。(3)注射后连续观察大鼠的一般情况及关节炎症表现,测定不同时间点各组大鼠的踝关节足垫厚度,并进行关节炎指数(AI)评定。(4)各组大鼠于第28天摘取眼球取血,离心备用,测定各组大鼠血浆总SOD活力与MDA含量。(5)采血处死后取大鼠双膝关节滑膜组织,4﹪多聚甲醛固定,石蜡包埋,行苏木素-伊红(HE)染色,光镜下观察关节滑膜衬里层细胞(LCC)增生,衬里下层炎细胞浸润及血管翳形成等病理变化。(6)对大鼠滑膜组织进行NF-κB、TNF-α的SP免疫组织化学染色,采用真彩色病理图像分析系统进行定量分析。(7)应用SPSS13.0统计软件进行统计分析。结果:(1)关节炎指数(AI):第Ⅱ组大鼠造模后各时间点的AI均高于第Ⅰ组(P<0.01),造模后18天开始比第15天显著升高(P<0.01),但高峰出现在造模后21天;Ⅲ～Ⅴ组造模后18天开始比第15天显著升高(P<0.05),高峰出现在造模后18天,Ⅲ～Ⅴ组间AI无统计学差异(P>0.05)。(2)足垫厚度:第Ⅱ组大鼠造模后15天右足垫厚度高于第Ⅰ组(P<0.05),第18～21天达到高峰,之后有所下降(P<0.01)。Ⅲ～Ⅴ组于造模第15天右足垫厚度高于第Ⅰ组(P<0.05),第18～21天达到肿胀高峰。Ⅲ～Ⅴ组于第21～27天明显低于第Ⅱ组(P<0.05),但三组之间无统计学差异(P>0.05)。(3)血浆总SOD活力:第Ⅱ～Ⅴ组大鼠造模后第28天血浆总SOD活力低于第Ⅰ组(P<0.01),Ⅲ～Ⅴ组血浆总SOD活力高于第Ⅱ组(P<0.05),但Ⅲ～Ⅴ组间血浆总SOD活力无统计学差异(P>0.05)。(4)血浆MDA含量:第Ⅱ～Ⅴ组大鼠造模后第28天血浆MDA含量高于第Ⅰ组(P<0.01),Ⅲ～Ⅴ组血浆MDA含量低于第Ⅱ组(P<0.01),Ⅲ~Ⅴ组间血浆MDA含量亦无统计学差异(P>0.05)。(5)滑膜NF-κB、TNF-α的积分光密度(IOD)值:造模后第28天Ⅱ～Ⅴ组大鼠NF-κB、TNF-α的IOD值均显著高于第Ⅰ组,有统计学差异(P<0.01);第Ⅲ～Ⅴ组NF-κB、TNF-α的IOD值在造模后28天明显低于第Ⅱ组,具有统计学差异(P<0.01),但第Ⅲ～Ⅴ组之间NF-κB、TNF-α的IOD值无统计学差异(P>0.05)。(6)相关性分析:AI与足垫厚度之间呈直线正相关;血浆总SOD活力与血浆MDA含量之间呈负相关,足垫厚度、血浆MDA含量与滑膜组织TNF-α、NF-κB的IOD值四者之间分别呈正相关。结论:(1)依达拉奉对CIA大鼠有明显的抗氧自由基作用及抗炎作用,能够降低CIA大鼠的关节炎指数,减轻足垫肿胀程度。(2)依达拉奉能减轻滑膜组织肿胀,减少膝关节滑膜衬里层的增生,提示依达拉奉可能能延缓CIA大鼠病程进展。(3)依达拉奉高剂量组与低剂量组对CIA大鼠的治疗作用无明显差异,提示依达拉奉的治疗效果可能不存在剂量依赖性。(4)依达拉奉能明显提高CIA大鼠血浆总SOD活力,降低血浆MDA含量,减少滑膜组织NF-κB、TNF-α的表达。(5)依达拉奉在抑制CIA大鼠的关节炎症、提高血浆总SOD活力,降低血浆MDA含量,减少滑膜组织NF-κB和TNF-α的表达方面与氯诺昔康无明显差别,提示依达拉奉对CIA大鼠抗炎作用与氯诺昔康相当,但依达拉奉的远期疗效还有待于进一步观察。(6)造模后血浆总SOD活力降低,MDA含量增高,滑膜组织NF-κB、TNF-α表达升高,并均与足垫厚度呈正相关,提示自由基、NF-κB、TNF-α在RA病理过程中发挥着重要作用。