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嗜线虫真菌Duddingtoniaflagrans培养技术及其对家畜胃肠道线虫病的防治试验嗜线虫真菌Duddingtoniaflagrans是迄今发现并研究证明最具有家畜胃肠道线虫病生物防制潜力的真菌。通过对该真菌的培养,制备大量的厚垣孢子,用于家畜胃肠道寄生虫病的生物防治已取得明显效果。本试验对引进的Duddingtoniaflagrans菌株进行了培养基筛选、厚垣孢子生产技术及菌种保存、制种、发酵和扩大培养等方面的研究,并用培养生产出的该真菌制剂对绵羊胃肠道线虫病进行了田间防治试验。
1.根据价格便宜、来源方便、制备简单、厚垣孢子生成多的原则,确定小麦为嗜线虫真菌D.flagrans的固体培养基质、5%马铃薯汁或玉米汁作为液体培养基的配方最佳。
2.嗜线虫真菌D.flagrans厚垣孢子最适生长温度为25-30℃、培养基最适pH范围为5.5-7.0;作为需氧真菌,D.flagrans最合适的培养基质装量(W)为培养容器容积的0.22-0.24,即250毫升三角瓶装小麦60克左右。
3.低温冷冻可长期保存嗜线虫真菌D.flagrans菌种。将该真菌CMA琼脂培养物装入含20%甘油PBS的Ependorf管中冻存于液氮中,至少可保存78个月。将菌种直接冻存于-25℃可保存48个月。该真菌WA、CMA、PA琼脂培养平板用Parfilm膜封口后置4℃冰箱可保存12个月。
4.PA、CMA和WA琼脂平板可作为该真菌一级种子的良好培养基。该真菌固体二级种子以250毫升三角瓶为培养容器,配方为小麦60克、5%马铃薯汁或玉米汁48毫升,厚垣孢子数可达5×105以上。该真菌扩大培养采用PVC塑料袋为发酵培养容器,成本低,方便实用,可满足大量生产,孢子数达5×105以上。
5.用上述方法生产出的厚垣孢子以5×105/kg体重的剂量作为饲料添加剂,对伊犁地区围栏草场放牧的绵羊进行胃肠道线虫防制的田间试验。结果表明,该真菌可使放牧草场中三期幼虫较对照组减少82.6%;粪便EPG较对照组减少87.3%。表明用该技术生产的厚垣孢子具有良好的生物防治性能,能够用于放牧家畜胃肠道线虫病的防治。