水稻抗虫相关基因OsICS和OsHPL3的功能分析

来源 :浙江大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:p_y112233
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
当植物受到病原菌及植食性昆虫危害后,会产生一系列的诱导防御反应。在一些双子叶植物如拟南芥和烟草等中的研究表明,水杨酸和绿叶性气味分别可作为信号分子及防御化合物在植物的诱导防御反应过程中发挥着重要作用。然而,作为单子叶模式植物的水稻,在这方面的研究还很少。为此,我们想通过实验进一步明确在单子叶模式植物水稻中是否也存在着一条异分支酸途径来合成水杨酸,以及该途径在抗虫防御反应中究竟发挥着什么作用?同时,与作为防御反应相关的重要物质茉莉酸竞争相同底物的绿叶性气味在水稻对白背飞虱的抗性防御反应也未见报道。因此,本文选择受褐飞虱取食诱导的水稻异分支酸合成酶基因OsICS和合成水稻绿叶性气味的脂氢过氧化物裂解酶基因OsHPL3为研究对象,结合利用反向遗传学、化学分析、分子生物学以及生物测定等研究方法,对OsICS的抗虫相关功能及OsHPL3调控的绿叶性气味在水稻对白背飞虱抗性防御反应中的作用进行了研究,获得的主要结果如下:克隆了异分支酸合成酶基因OsICS,该基因的开放阅读框为2445bp,编码一个由814个氨基酸组成的蛋白质,预测分子量为88.024KD,pI值为5.92。OsICS编码的蛋白定位于叶绿体。组织表达谱分析发现OsICS的转录水平在水稻叶内要明显高于水稻中的其它部位;诱导表达谱分析发现褐飞虱(Nilaparvata lugens, rice brown planthopper, BPH)、白背飞虱(white back planthopper, WBPH)和二化螟(Chilo suppressalis, rice striped stem borer, SSB)取食、机械损伤处理均能诱导OsICS基因的表达,而外源激素茉莉酸(Jasmonic acid, JA)和水杨酸(Salicylic acid, SA)不诱导其表达,甚至后期有一定的抑制作用。我们利用农杆菌转化法,获得了水稻OsICS反义抑制突变体植株,经检测,该反义纯合品系中OsICS的转录水平比野生型水稻中分别降低了46.23%-50.86%。各品系表型研究结果表明,OsICS反义突变体植株在水稻萌发期及温室内种植时均显著矮于野生型水稻。同时,温室内种植的水稻反义品系本底SA含量明显低于野生型,且室内各品系受褐飞虱和二化螟取食诱导后,OsICS反义品系中SA含量也显著低于野生型水稻。我们接下来利用该突变体中SA含量的降低,对不同害虫进行了生测实验。结果表明,反义品系能明显增加水稻对BPH和WBPH的选择性,但产卵量并无明显差异,当外源SA处理后则可恢复BPH和WBPH对突变体的取食选择性;OsICS反义品系并不影响虫害诱导的水稻JA、胰蛋白酶抑制剂(trypsin protease inhibitors, TrypPIs)和乙烯(ethylene, ET)的合成,同时对BPH、WBPH的若虫发育历期和二化螟的生长均无明显影响。水稻OsHPL3表达谱分析表明,机械损伤、SSB、BPH和WBPH为害均能够诱导OsHPL3的表达,而外源激素JA和SA处理对其无明显影响。我们利用相同方法获得了反义抑制OsHPL3单拷贝纯合品系。实验发现,OsHPL3表达水平的下调会引起突变体受机械损伤和白背飞虱取食诱导的GLV (Z)-3-hexenal、(E)-2-hexenal和1(Z)-3-hexen-1-ol的含量显著下降,该反义突变体明显提高了水稻对刺吸式口器害虫WBPH的抗性,可导致WBPH成虫对转基因水稻的选择性、产卵量及取食量均明显下降。同时,取食反义品系水稻的WBPH雌雄若虫发育历期均显著延长,存活率比野生型明显下降,以反义品系为食的若虫孵化后继续在该品系上产卵,其产卵量也显著低于以野生型植株为食的对照植株。当分别回补不同浓度的GLV后,发现(Z)-3-hexenal处理能恢复OsHPL3反义品系对WBPH的抗性影响。挥发物测定结果表明,反义品系能明显增加WBPH为害诱导的(+)-limonene,2-heptanol, sesquisabinene和β-sesquiphellandrene的释放量,其释放总量也有一定程度增加,但未达到显著差异水平,其他挥发性物质的释放量并无明显差异。对WBPH天敌稻虱缨小蜂的寄主选择性实验表明,小蜂更多地选择能合成释放较多GLV的野生型水稻植株,当外源回补3种不同浓度的GLV(Z)-3-hexenal、(E)-2-hexenal和(Z)-3-hexen-1-ol处理可以恢复反义品系对稻虱缨小蜂选择性的影响。综合以上结果表明,OsHPL3通过影响GLV的合成来调控水稻对WBPH的直接和间接防御反应。
其他文献
本研究将大丽轮枝菌在棉花组织诱导和非诱导(查比克基础培养)体系中分别进行培养,观察其生长表型,提取分泌蛋白并进行致病性研究。结果表明棉花组织诱导培养基更适合大丽轮枝菌的
目的研究叶酸和B组维生素对治疗高同型半胱氨酸(Hcy)血症及冠心病的影响。方法选择2008年1月至2009年1月郑州大学第一附属医院住院的冠心病并高同型半胱氨酸血症患者108例,随
玉米是全世界最重要的粮食作物之一。涝渍是热带、亚热带地区玉米生产的主要逆境胁迫之一,也是我国南方地区影响玉米最终产量的主要逆境因子之一。本研究旨在采用关联分析和
通过故障树分析建立了作战飞机仿真逻辑关系.在修正线性同余法的基础上获得了随机数模型.在各设备故障发生状态和修复状态识别的基础上,建立了可靠性维修性仿真模型,确定了作
我国具有丰富的劳动力资源及低廉的价格,使得企业在国际化市场竞争中具有较大的用工成本的优势,但伴随人口红利消失、社会保险制度日渐完善并走向法制化,企业分配在社会保险
菌株N07W61是由前期筛选获得的具有棘白霉素B脱酰基酶活性的菌株.通过形态特征、培养特征观察、生理生化特征、胞壁分析及16SrDNA基因序列同源性分析等多相分类研究对该菌株