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非生物胁迫诱导了细胞中活性氧的大量产生。植物质膜NADPH氧化酶催化产生的活性氧被认为是逆境胁迫中活性氧产生的一个重要来源。我们根据已发表序列克隆得到了烟草NADPH氧化酶的cDNA,并对所得的序列进行了生物信息学分析,结果显示,该序列是含有植株NADPH氧化酶的保守结构域。序列修饰分析结果表明,该酶除了可以被钙直接结合外,也可能被诸如磷酸化等调控机制调控。
通过构建PET-NAO原核表达载体,原核表达获得了NADPH氧化酶C末端部分片断的目的蛋白,并利用其获得了效价1:1000的兔抗血清。同时我们构建了CaMV35S启动子驱动的NADPH氧化酶过表达载体NAO和两个RNAi载体(NAOa,NAOb),农杆菌介导获得转基因烟草。经基因组DNAPCR、RT-PCR和Westernblot检测,共获得阳性转基因植株NAO10株、NAOa8株和NAOb12株。
已有研究显示,体外H2O2处理拟南芥诱导了体内抗氧化物酶基因表达的增加。然而内源活性氧对植株体内抗氧化物酶的活性的影响还不清晰。我们测定了转基因烟草内CAT、POX、APX、GR和SOD酶活性。与对照植株相比,过量表达NADPH氧化酶的转基因植株内这五个酶的活性均有不同程度的升高,干扰植株体内抗氧化物酶活性与此相反,两个干扰株系中各抗氧化物酶活性都受到了抑制。这些结果说明,植株体内存在着一个自动协同机制以消除活性氧的过量产生和产生减少对植物所带来的
Cu2+诱导了小麦根NADPH氧化酶活性的升高。我们的实验显示Cu2+诱NADPH氧化酶转录和活性的的升高。我们的数据显示,Cu2+激活PLD参与调节的NADPH氧化酶活性升高所催化产生的活性氧是Cu2+胁迫下活性氧的主要来源之一。我们推测,同哺乳动物NADPH氧化酶相似,植物NADPH氧化酶活性也可以受到PLD和PA的调控。