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目的:为探讨早期糖尿病肾病中医证候与体重指数(BMI)、同型半胱氨酸(HCY)、尿微量白蛋白排泄率(UAER)的关系,筛选早期糖尿病肾病肝肾阴虚证、气阴两虚证和脾肾阳虚证三种证型之间尿液差异蛋白质,发现早期糖尿病肾病的中医证候生物学标记。方法:选择符合纳入标准的早期糖尿肾病患者(即Mogensen分期的Ⅲ期),并经中医辨证分型,肝肾阴虚证、气阴两虚证和脾肾阳虚证各组均入选50例,检测患者身高、体重、血糖、肾功能、尿常规、24小时尿微量白蛋白、血清同型半胱氨酸,并进行比较;从三组证型中分别随机抽取8份尿样,经除盐、超滤、离心等方法提取并浓缩尿液蛋白质,进行尿液双向蛋白电泳,硝酸银染色后的凝胶图谱进行软件分析,寻找差异蛋白质点,差异蛋白经胶内原位酶解后进行MALDI-TOF-MS肽质量指纹图的测定,利用MascotDistiller软件搜索NCBI蛋白质数据库,将查询到的结果再结合双向凝胶电泳图谱上相应点的表观等电点、分子质量、匹配肽段的多少和覆盖率等进行综合分析,寻找与之匹配的相关蛋白质,鉴定的蛋白质名称及相应的分子量。再从每种证型中随机选取4份尿样,对动力蛋白和转铁蛋白进行Western-blot验证。结果:(1)肝肾阴虚证、气阴两虚证、脾肾阳虚证三种证型间UAER分别为96.24±46.63 mg/24h、93.38±39.14 mg/24h、101.32土49.65 mg/24h,经统计学处理,无显著性差异(P>0.05);肝肾阴虚证、气阴两虚证、脾肾阳虚证血清 HCY浓度分别为 15.26±2.41 umol/1、20.38±2.69 umol/1、25.46±2.42 umol/1,呈依次增高,经统计学处理有显著性差异(P<0.01);肝肾阴虚证、气阴两虚证、脾肾阳虚证三种证型间BMI分别为18.40±1.29 Kg/m2、26.72±2.12 Kg/m2、27.05±1.89Kg/m2,经统计学处理,肝肾阴虚证的BMI明显低于气阴两虚证和脾肾阳虚证(P<0.01),而气阴两虚证与脾肾阳虚证之间无显著性差异(P>0.05)。(2)经双向凝胶蛋白电泳分析肝肾阴虚证、脾肾阳虚证和气阴两虚证患者尿蛋白凝胶的平均蛋白质点为789、791和879,找出差异蛋白质点22个。(3)经质谱鉴定其中高匹配的差异蛋白质12种,分别是白蛋白、NOGO蛋白、IgKapp chain、动力蛋白、单克隆抗体IgM、转铁蛋白、转甲状腺素蛋白、前列腺素特异性抗原、α1抗胰蛋白酶、Chain A。其中白蛋白3种系被修饰所致。(4)经Western-blot验证,气阴两虚患者动力蛋白(Dynein)和转铁蛋白(transferrin)均比脾肾阳虚或肝肾阴虚患者高表达。结论:第一、双向蛋白电泳与质谱鉴定技术开展中医证候差异蛋白筛选技术上可行。第二、白蛋白、NOGO蛋白、动力蛋白、转铁蛋白、转甲状腺素蛋白、α1-抗胰蛋白酶、IgM、免疫球蛋白Kappa链、A链等11种蛋白可能是早期糖尿病肾病肝肾阴虚证、气阴两虚证、脾肾阳虚证三种证型间的差异蛋白质。在气阴两虚证高表达的有:动力蛋白、转铁蛋白、IgKappa链、和两种白蛋白。在肝肾阴虚证高表达的蛋白质有:Nogo蛋白、单克隆抗体IgM。脾肾阳虚证高表达的蛋白质有:转甲状腺素蛋白、α1-抗胰蛋白酶、前列腺素特异性抗原,脾肾阳虚证单独表达的有:白蛋白(分子量52047.8)、A链。第三、体重指数与早期糖尿病肾病中医证候有一定性相关性。第四、血清同型半胱氨酸可以作为早期糖尿病肾病中医辨证分型的依据之一。