研究背景:目前研究认为,肿瘤细胞、肿瘤分泌的细胞因子和骨髓骨微环境之间的相互作用在骨肿瘤的发生发展起着不可或缺的作用。在肿瘤基质细胞中,肿瘤相关巨噬细胞(Tumor-associated macrophages,TAMs)在数量和功能上具有重要的地位。我们前期研究发现,在尤文肉瘤组织中存在大量的TAMs浸润,另外,本课题组已研究证实let-7a在尤文肉瘤充当抑癌基因的角色,可以抑制尤文肉瘤的生长。但在尤文肉瘤中,let-7a是否与巨噬细胞的浸润相关?目前未见相关报道,针对这一问题,我们进行了相关的研究。研究目的:探讨let-7a对尤文肉瘤巨噬细胞浸润和尤文肉瘤恶性表型的影响及其机制。方法:首先,Real-time PCR检测let-7a在16例尤文肉瘤组织及细胞的相对表达量;免疫组化检测尤文肉瘤组织TAMs CD68+细胞的浸润程度,并与let-7a表达量行相关性分析;单核细胞趋化实验检测尤文肉瘤过表达let-7a对外周血单核细胞趋化的影响;CCK-8法、细胞划痕实验、Transwell实验以及单核细胞趋化实验分别检测尤文肉瘤细胞过表达let-7a后对其增殖、迁移、侵袭以及外周血单核细胞募集能力的影响;生物信息学分析let-7a靶基因预测结果,确定候选靶基因,双荧光报告试验、Rescue实验以及Western Blotting实验验证let-7a的靶向作用;最后,构建尤文肉瘤裸鼠荷瘤模型,局部注射观察let-7a mimic对瘤体生长的影响以及对巨噬细胞浸润的影响,并进行相关分析。结果:Real-time PCR结果显示let-7a在尤文肉瘤组织和细胞中表达下降,免疫组化结果显示尤文肉瘤组织高表达TAMs标志物CD68,巨噬细胞的浸润程度与let-7a的表达量呈负相关,这些结果提示let-7a在尤文肉瘤可能充当抑癌基因的角色,并参与调节尤文肉瘤组织巨噬细胞的浸润;细胞功能学性实验证实,过表达let-7a可以显著抑制其增殖、迁移、侵袭以及对外周血单核细胞的募集能力;生物信息学分析我们确定信号转导与转录激活因子3(Signal transducer and activator of transcription-3,STAT3)为我们感兴趣的靶基因,双荧光报告实验、Rescue实验及Western Blotting实验证实STAT3为let-7a的直接靶基因,let-7a通过直接靶向STAT3介导抑癌以及对巨噬细胞募集的作用;最后,裸鼠荷瘤实验我们发现,恢复let-7a的表达可明显地抑制瘤块的生长以及巨噬细胞的浸润,同时靶基因STAT3的表达也明显下调。结论:在尤文肉瘤中,抑癌基因let-7a可以抑制巨噬细胞的浸润以及肿瘤的恶性表型,其机制是部分通过let-7a/STAT3轴实现的,这为将来尤文肉瘤的分子治疗提供理论依据。