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目的:扶正解毒活血方及黄芪提取物促血管新生改善糖尿病伤口愈合机制研究。超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)对FZJDHX水提物进行有效成分分析及含量测定。方法:1.建立db/db糖尿病小鼠皮肤伤口模型,动态监测伤口愈合率及血流变化并拍照记录伤口状态变化,观察FZJDHX水提物和黄芪提取物的作用效果;保存给药过程中第7天和14天的伤口皮肤,通过免疫组化染色观察FZJDHX水提物对组织中vWF和VEGFR-2的影响。建立体外高糖损伤HUVECs细胞模型:利用划痕实验、Transwell实验和小管形成实验检测FZJDHX水提物和黄芪提取物对高糖损伤HUVECs细胞迁移和小管形成能力的影响;q-PCR检测FZJDHX水提物和黄芪提取物对炎症标记物IL-6、NF-κB、ICAM-1、VCAM-1 mRNA表达情况;Western blot检测FZJDHX水提物和黄芪提取物对VEGFR-2、eNOS、CD31、PARP-1表达的影响。2.采用ACQUITY UPLC(?)HSS C18 column(1.8μm,2.1×100 mm)色谱柱,流动相为0.1%甲酸水(A)-乙腈(B)梯度洗脱,洗脱程序为20%B,2-8 min,20-95%B,8-9 min,95%B,9-10 min,20%B。流速为0.3 ml/min,进样量为1μl。柱温40℃,采用ESI离子源,多重反应监测(MRM)扫描模式,对FZJDHX水提物中黄芪甲苷、大黄素、咖啡酸、绿原酸、羟基红花黄色素A、山奈素、地肤子皂苷Ic和欧前胡素的含量测定。结果:1.体内动物实验研究结果显示,与模型组相比,FZJDHX水提物外洗给药在第7天(P<0.05)和第10天(P<0.01)可以显著促进db/db糖尿病小鼠皮肤伤口的愈合;在第10天(P<0.05)和第12天(P<0.01)显著提高伤口局部血液供应;皮肤组织免疫组化结果显示在第7天显著提高伤口局部VEGFR-2(P<0.01)和vWF(P<0.05)表达。体外细胞实验结果显示,与模型组相比,FZJDHX水提物高剂量组(12.5μg/ml)可以显著促进高糖损伤HUVECs的迁移(P<0.01),促进HUVECs的小管形成(P<0.05),降低HUVECs细胞ICAM-1,VCAM-1,IL-6,NF-κB基因的表达(P<0.01),升高HUVECs细胞eNOS,VEGFR-2,CD31的蛋白表达(P<0.05),降低PARP-1的蛋白表达(P<0.01)。2.体内动物实验结果表明,与模型组相比,黄芪提取物在第7天到第16天显著促进db/db糖尿病小鼠皮肤伤口的愈合(P<0.01);在第10天(P<0.05)、第12天(P<0.05)和第14天(P<0.01)显著提高伤口局部血液供应。体外细胞实验表明,与模型组相比,黄芪提取物高剂量组(25μg/ml)可以显著促进高糖损伤HUVECs的迁移(P<0.01),促进HUVECs的小管形成(P<0.05),降低HUVECs细胞ICAM-1,VCAM-1,IL-6,NF-κB基因的表达(P<0.01),升高HUVECs细胞eNOS,VEGFR-2,CD31的蛋白表达(P<0.05),降低PARP-1的蛋白表达(P<0.05)。3.UPLC-MS/MS分析结果显示,FZJDHX水提物的监测离子对及含量分别为:黄芪甲苷m/z 829.5→m/z 783.5/178.9,0.4539μg/mg。地肤子皂苷Ic m/z 763.5→m/z455.2,0.2448μg/mg。羟基红花黄色素A m/z 611.1→m/z 491.2,0.3590μg/mg。绿原酸m/z 353.2→m/z 191.1,0.3228μg/mg。山奈素m/z 299.1→m/z 132.1,0.0013μg/mg。大黄素m/z 269.2→m/z 195.3,0.1427μg/mg。咖啡酸m/z 179.2→m/z 134.1,0.0622μg/mg。欧钱胡素m/z 271.2→m/z 147.1,0.0001μg/mg。结论:1.FZJDHX水提物和黄芪提取物均可以显著促进db/db糖尿病小鼠皮肤伤口愈合,明显改善皮肤伤口局部血液供应,FZJDHX水提物可提高伤口局部皮肤VEGFR-2和vWF表达;FZJDHX水提物和黄芪提取物显著改善高糖损伤HUVECs细胞迁移及小管形成功能,降低炎症因子ICAM-1,VCAM-1,IL-6,NF-κB基因表达,促进血管新生相关蛋白VEGFR-2、eNOS、CD31的表达以及抑制PARP-1的表达。2.UPLC-MS/MS结果显示,FZJDHX水提物中含有黄芪甲苷、大黄素、咖啡酸、绿原酸、羟基红花黄色素A、山奈素、地肤子皂苷和欧前胡素这八种化合物。