背景:卵巢上皮癌(Epithelial ovarian cancer,EOC)是发达国家中,妇科癌症伴有晚期疾病患者死亡的首要原因,5年生存率约20%。虽然近年来多数患者生存中位数有所改善,但大部分患者由于出现化疗抵抗,最终还是出现复发,进展为渐进性疾病。因此,关于卵巢癌的治疗、诊断与预后都应受到高度重视。癌抗原125(cancer antigen 125,CA125)是粘蛋白16(Mucin 16,MUC16)的串联重复结构域的重复肽表位,在早期即已作为卵巢癌的诊断标志物。MUC l6的胞外结构域可通过与间皮素及乳糖凝集素的相互作用,调节细胞粘着、运动与侵袭,在卵巢癌的转移过程中发挥了重要作用,其胞内结构域则可能通过参与细胞转导的通路来调节卵巢癌细胞的功能。本文通过研究发现CA125对卵巢癌细胞侵袭能力具有明显促进作用,我们进一步探索其影响机制,为今后临床对卵巢癌的诊治提供重要参考依据。目的:一、通过细胞增殖和侵袭相关实验,观察CA125对卵巢癌细胞的增殖和迁移侵袭能力的影响作用。二、将进一步对CA125影响卵巢癌细胞增殖或迁移的作用机制进行探索,找出其作用途径及相关蛋白。三、收集临床卵巢癌患者入院后的初次CA125检测水平,分析血清CA125的水平变化与卵巢癌的疾病进展的关系,证明血清CA125的水平对卵巢癌的疾病进展的提示作用,找出新的判断卵巢癌转移情况的CA125临界参考值。为临床对卵巢癌的治疗及预后提供基础。方法:一、采用不同浓度的CA125蛋白刺激卵巢癌细胞A2780和OVCAR3,利用MTT实验观察刺激后细胞的增殖变化,用Transwell迁移实验证明MUC16/CA125对卵巢癌细胞的迁移的影响作用。二、将DKK1与CA125同时作用于卵巢癌细胞后观察细胞迁移的变化情况。三、用不同浓度的MUC16/CA125蛋白刺激卵巢癌细胞后提取蛋白样本,利用Western Blot实验及酶联免疫吸附实验(ELISA),尝试找出CA125引起卵巢癌细胞迁移能力改变的相关蛋白。提取刺激后的卵巢癌细胞总RNA,用实时荧光定量检测细胞中相关蛋白的核酸变化,探索与CA125引起卵巢癌细胞迁移改变的相关蛋白与分子,并进一步探索CA125影响卵巢癌细胞迁移能力改变的作用信号通路(Signal pathway)。四、将DKK1进行过表和沉默后观察细胞迁移变化情况。五、收集临床诊断为卵巢癌患者的血清CA125水平、癌症转移情况和年龄,做受试者工作特征曲线(Receiver Operating Characteristic,ROC曲线)判断血清CA125的水平与癌症转移之间的关系,并找出新的能够判断卵巢癌转移的CA125水平临界值82.9U/ml。结果:一、用浓度分别为0.2μg/ml和0.4μg/ml的CA125蛋白刺激卵巢癌细胞48小时,发现CA125对细胞的增殖影响并不显著,但细胞迁移实验发现,经CA125蛋白刺激48小时后,卵巢癌细胞的迁移能力明显增强,但两种细胞对CA125蛋白刺激引起的迁移能力的改变情况并不完全一致。二、将DKK1与CA125同时作用于卵巢癌细胞时,DKK1表现出抑制CA125对细胞迁移的促进作用。三、利用核酸及蛋白检测技术探索CA125影响卵巢癌细胞迁移的作用通路,核酸及蛋白检测发现两种卵巢癌细胞在经CA125蛋白刺激后,DKK1的表达均显著降低,且DKK1表达的降低对CA125的刺激有一定的浓度依赖性。四、从四种卵巢癌细胞株A2780、OVCAR3、SKOV-3及CAOV-3中选择细胞株,进行DKK1过表及沉默并做细胞迁移实验,结果发现,DKK1过表达能够抑制CA125对卵巢癌细胞OVCAR3的迁移促进作用,而DKK1沉默后表现出对卵巢癌细胞显著的促迁移作用,这为之后的CA125影响卵巢癌细胞迁移增强的机制研究提供了有力基础。五、收集临床卵巢癌患者入院后的初次CA125检测水平,患者年龄以及患者肿瘤转移情况。用患者的血清CA125水平及肿瘤转移与否做ROC曲线分析,发现卵巢癌患者的血清CA125水平可以用作判断患者肿瘤转移与否的参考标准,参考临界值为(82.9 U/ml),且相关性分析发现患者的年龄与血清CA125水平均对卵巢患者的肿瘤转移有着重要的参考价值。结论:一、CA125对卵巢癌具有促进作用,主要是显著促进卵巢癌细胞的迁移,且促进作用具有一定的CA125浓度依赖性,为进一步研究CA125对卵巢癌疾病进展的影响提供了基础。二、CA125可能通过Wnt信号通路来发挥其对卵巢癌细胞迁移的促进作用,且DKK1参与CA125影响卵巢癌细胞迁移的作用过程,为下一步对CA125影响卵巢癌细胞的迁移能力的机制研究提供了有力基础。三、血清CA125水平可以作为临床判断卵巢癌患者肿瘤转移的参考指标,为临床卵巢癌患者的疾病诊治及预后提供指导。