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近年来,番茄颈腐根腐病日益严重,已成为最具破坏性的番茄土壤病害之一,严重威胁我国棚室冬春番茄生产。本试验从山东五地区采集病样,进行了病原菌鉴定,并对其生物学特性、定殖特性进行了系统研究;通过正交设计方法筛选出番茄苗期颈腐根腐病抗病性鉴定方法,为番茄抗颈腐根腐病育种奠定基础。 1.采集山东各地(单县、临淄、胶州、寿光、即墨)番茄植株的发病病样,对病原菌进行了分离纯化和形态、分子鉴定,并用北京颈腐根腐病病原菌作为对照。结果表明各地区病原菌均为尖饱镰刀菌,但从菌落形态及接种鉴定结果显示单县地区病原菌与其他地区病原菌不同,其他地区与北京颈腐根腐病病原菌在菌落形态及接种发病状况基本一致,认定其为同一种病原菌。 2.为了进一步判断分子及形态鉴定结果的准确性,我们对以上地区病原菌的生物学特性进行了研究,适于单县地区病原菌生长的最适条件为温度、pH、碳源及氮源分别为30℃、pH8、葡萄糖和硝酸钾;适于北京及其他四地区病原菌生长的最适条件为25℃、pH8、葡萄糖和硝酸钾。因此我们暂且认定单县地区病原菌为枯萎病病原菌,其他地区病原菌为颈腐根腐病病原菌。 3.对番茄颈腐根腐病原菌进行gfp基因转化,得到稳定遗传的转化子,将转化子接种到感病番茄材料上对其进行定殖特性研究。运用共聚焦激光扫描显微镜跟踪观察标记病原菌在番茄植株内的侵染过程,结果显示侧根是病原菌初侵染主要位点,并且随着时间推移,病原菌不断由根与茎部的表皮向内皮层侵染。 4.本试验采用L9(34)正交设计方法研究了番茄颈腐根腐病苗期抗性鉴定技术。筛选出苗期接种鉴定最佳方法:接种方法采用浸根法,接种浓度为107个/ml,接种苗龄为2片真叶。