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目的:通过研究苗药血人参的总黄酮提取工艺、薄层色谱鉴别和含量测定,从而建立起血人参药材的质量标准,促进该药用资源的开发利用。同时,通过分析比较种植和野生的血人参药材,为该药材驯化研究提供科学依据。 方法: (1)通过对血人参总黄酮提取参数中乙醇浓度、固液比、提取时间及提取次数进行单因素试验,采用L9(34)正交优化试验法进一步优化,以总黄酮纯度和总黄酮提取率作为考察指标。优化血人参总黄酮的提取工艺。 (2)运用半制备高效液相色谱法制备对照品A(schizandriside)和对照品(2α,3α-epoxy-5,7,3′,4′-tetrahydroxyflavan-(4β→8)-epicatechin),建立以原儿茶酸、表儿茶素为参照和以儿茶素以及两种自制标准品为参照的两种血人参药材薄层色谱(TLC)鉴别方法,并对不同产地血人参药材进行鉴定。 (3)使用高效液相色谱法(HPLC),建立同时测定血人参药材中4种指标性成分的含量测定方法,并使用该方法测定10批不同产地血人参药材中4种指标性成分的含量。 (4)通过优化得到的血人参TLC鉴别方法对种植药材进行鉴定;使用优化得到的HPLC含量测定方法测定6批种植药材中4种指标性成分含量;对比种植和野生药材乙酸乙酯萃取层指纹图谱相似度,分析种植和野生血人参药材之间的差异,对驯化血人参药材进行品质评价。 结果: (1)经过正交试验得出的最佳工艺条件为:乙醇浓度50%,固液比l∶30,提取时间1.5h,水浴回流提取2次,在此条件下血人参总黄酮的平均提取率为7.42mg/g。 (2)经检测自制的两种化合物纯度≥98%、在6个月内稳定,达到规定标准;所建立两种血人参药材的TLC鉴别方法分别为:①以原儿茶酸、表儿茶素为对照,纯水加热回流提取1h的血人参药材为供试品,GF254高效板上以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(50:55:15)为展开剂,展开两次,碘显色后可见光下检视;②以儿茶素、对照品A、对照品B为对照,纯甲醇回流提取1h的血人参药材为供试品,GF254高效板上以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(100:50:15)为展开剂,展开两次,碘显色后可见光下检视,经方法学考察以上两种方法特征性强,稳定性、重复性和重现性良好。 (3)建立的血人参药材中4种指标性成分的测定方法下儿茶素线性范围为1.28~8.96μg(r=0.9995),平均回收率为101.23%,RSD为1.51%;表儿茶素线性范围为1.15~8.05μg(r=0.9999),平均回收率为99.49%,RSD为2.18%;对照品A线性范围为0.83~4.98μg(r=0.9999),平均回收率为101.88%,RSD为3.35%;对照品B线性范围为0.83~5.81μg(r=0.9999)平均回收率为101.46%,RSD为3.02%,所测定的10批不同产地、不同采收时间的样品4组分含量范围分别为儿茶素:0.4421~0.5028mg/g;表儿茶素0.6063~0.8382mg/g;对照品A:0.8422~1.0160mg/g;对照品B:0.3092~0.5093mg/g,经考察该方法结果准确、科学可行、简单方便, (4)通过TLC法比较,种植血人参药材均能在标准品对应位置找到相同色谱斑点;通过测定,种植血人参药材中4中指标性成分含量为儿茶素:1.2917~1.4050mg/g,平均含量1.3604mg/g,RSD:3.52%;表儿茶素:1.4234~1.4631mg/g,平均含量1.4422mg/g,RSD:1.32%;对照品A:1.3958~1.5545mg/g,平均含量1.4469mg/g,RSD:4.02%;对照品B:0.3520~0.4587mg/g,平均含量0.3901,RSD:3.18%,除对照品B外其余3个指标性成分含量均远远高于野生药材;6批种植药材与野生药材乙酸乙酯萃取层指纹图谱共有模式相似度为0.972~1.000,共有的16个峰的平均峰面积总和为种植:38153.47、野生:19715.87,种植药材品质高于野生药材。 结论:本研究填补了血人参药材总黄酮提取工艺研究的空白;建立的薄层鉴别和含量测定方法标准简单科学,便于操作,补充完善了血人参药材质量标准研究;经研究驯化和规范化的种植有助于血人参药材品质提高,为血人参作为药用资源开发研究以及该药材深入驯化研究提供了科学依据。