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马鲛鱼属近海温水性洞游深海野生鱼,是一种经济价值较高的优质海产鱼类。在我国东海、黄海、渤海和南海均有分布,但以海南文昌铺前深海大马鲛鱼的肉质最佳。海南人食用马鲛鱼已有数百年的历史,而民间早有“山上鹧鸪獐,海里马鲛鱼”的美誉。海南以其得天独厚的环境和气候优势,年产马鲛鱼数量可观。然而,目前马鲛鱼的研究应用主要处于简单加工阶段,新型马鲛鱼产品的开发亟待发掘。本实验以马鲛鱼鱼肉为研究对象,通过蛋白酶酶解制备具有ACE抑制活性的酶解液,结合现代分离纯化手段,获得ACE抑制肽,并对其进行结构鉴定,旨在提供马鲛鱼的部分功能性基础数据,并为ACE抑制肽的构效关系研究提供理论基础和实验依据。本文的主要研究内容如下：1实验中以马鲛鱼鱼肉为原料,分别选用胃蛋白酶,复合蛋白酶,胰蛋白酶和Alcalase蛋白酶酶解马鲛鱼鱼肉蛋白。并在其各自的最适酶解温度和pH,料液比为1：3的条件下,酶解5h。以ACE抑制率为指标,评价这四种酶解产物的ACE抑制效果,选取最佳酶。当酶解产物的蛋白质浓度为lmg/mL时,其ACE抑制率分别为10.45%,41.97%,38.68%和61.63%。因此,选用抑制活性最高的Alcalase酶解物作进一步的分离纯化。2.依次采用截留分子量为10KDa和5KDa的超滤膜对Alcalase酶解产物进行分离,由此得到三个超滤组分,分别记为MH-Ⅰ(分子量>10KDa),MH-Ⅱ(10KDa>分子量>5KDa),MH-Ⅲ(分子量<5KDa)。其中,MH-Ⅲ组分的抑制活性最高,当其蛋白质浓度为1mg/mL时,ACE抑制率为78.32%。随后,通过Sephadex G-25凝胶过滤层析进一步纯化MH-Ⅲ组分,由此分离得到7个不同的组分,分别记为A-G,其中以组分E的ACE抑制活性最高(IC50值为0.39mg/mL)。最后,经两步RP-HPLC分离得到一个ACE抑制肽组分,纯度为97.9%,IC50值为0.0038mg/mL。3.组分E经两次RP-HPLC分离得到组分E3-Ⅰ,使用MALDI-TOF MS对E3-Ⅰ进行分子质量鉴定,其结果为825.2Da。随后,采用蛋白质/多肽测序仪测定组分E3-Ⅰ肽序,分析得到N末端三肽序列信息,即Ile-Tyr-Pro。