胃泌素/胃泌素受体环在多种肿瘤中的表达及阻断此环对细胞增殖和凋亡的影响

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目的研究胃泌素(gastrin,GAS)和胃泌素受体(gastrin receptor)在多种肿瘤中的表达,探讨阻断胃泌素受体对胃癌、肝癌、肺癌和乳腺癌细胞的增殖凋亡的影响,初步研究胃泌素/胃泌素受体环作用的信号通路。方法应用免疫组织化学检测多器官癌组织芯片中胃泌素的表达,同时检测临床标本胃癌、肝癌、肺癌和乳腺癌组织切片中胃泌素和胃泌素受体的表达,免疫细胞化学验证检测胃癌细胞SGC-7901、和AGS、肝癌细胞HepG2、肺癌细胞A549、和乳腺癌细胞MCF-7细胞株中胃泌素和胃泌素受体的表达;用胃泌素受体阻断剂丙谷胺分别处理SGC-7901、AGS、HepG2、A549、MCF-7细胞后,用MTT法检测各组细胞的增殖并绘制细胞生长曲线,Caspase-3酶活性试剂盒检测各组细胞的Caspase-3的酶活性,流式细胞仪检测各组细胞的细胞周期和Annexin V-FITC/PI双染法检测各组细胞的凋亡;利用Real-time RT-PCR方法定量检测丙谷胺处理胃癌SGC-7901和AGS细胞后对Wnt、NF-κB、PI3K-AKT-MTOR信号通路中关键因子β-连环蛋白(β-catenin)、核转录因子RelA (Nuelear factor-P65,P65)、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol3-kinase,PI3K)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,MTOR)、糖原合酶激酶3β(glycogen synthasekinase3beta,GSK-3β) mRNAs的相对表达量。结果组织芯片检测发现胃泌素在食管鳞状细胞癌、胃腺癌、结肠腺癌、肝细胞性肝癌、肺鳞状细胞癌、乳腺浸润性导管癌中表达阳性,肾癌中表达阴性;临床组织标本胃腺癌、肝细胞性肝癌、肺鳞状细胞癌和乳腺浸润性导管癌中胃泌素和胃泌素受体表达阳性;其相应的体外细胞株SGC-7901、AGS、HepG2、A549、MCF-7中胃泌素和胃泌素受体的表达阳性;用丙谷胺阻断胃泌素受体后,实验组细胞的生长曲线均低于对照组细胞,Caspase-3酶活性均高于对照组细胞(P﹤0.05);流式细胞仪检测结果显示:在AGS、SGC-7901、A549细胞中,丙谷胺处理组的细胞其S期细胞数低于丙谷胺未处理的对照组细胞,而G1/G0期细胞数高于对照组细胞(P﹤0.05);在所有检测的细胞中,丙谷胺处理组的细胞其凋亡细胞数高于丙谷胺未处理的细胞(P﹤0.05);用丙谷胺阻断胃泌素受体后,胃癌SGC-7901和AGS细胞中β-cateninmRNA相对表达量降低(P﹤0.05),PI3K mRNA相对表达量增高(P﹤0.05),而P65、MTOR、GSK-3β基因的表达无显著变化。结论胃泌素和胃泌素受体构成的自分泌环在胃癌、肝癌、肺癌和乳腺癌中表达,阻断此环能抑制多种肿瘤细胞的增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与胃泌素/胃泌素受体环激活细胞中Wnt信号通路有关。
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