纳米修饰DNA电化学传感器及其对转基因植物产品特定序列的检测

来源 :青岛科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jij0tl81f
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
以水热法合成十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)修饰的PbSe纳米粒子。在碳糊电极表面制备的PbSe纳米粒子壳聚糖(CHIT)复合膜上,实现了DNA的固定和杂交,并用循环伏安法和电化学交流阻抗法进行了表征。应用电活性分子亚甲紫(MV)作为杂交指示剂以微分脉冲伏安法对转基因植物CaMV35S启动子基因片段进行测定,定量检测范围为5.0×10-11-5.0×10-6mol/L,检测限为1.6×10-11mol/L(3σ)。该传感器对DNA互补序列、非互补序列和2碱基错配序列可很好地识别。 先将碳纳米管羧基化,然后将羧基化的碳纳米管(CNT)涂层于碳糊电极表面,制备了碳纳米管修饰电极。利用乙基-(3-二甲基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)为活化剂活化羧基,通过活化的羧基与末端衍生氨基的DNA之间的共价键合作用固定DNA,并以CNT为桥梁将辣根过氧化物酶(HRP)与探针DNA序列链接起来,形成HRP标记的探针DNA序列,杂交后使用电化学方法测定标记上的HRP的量,从而定量测定DNA,检测限为2.5×10-12mol/L。 将羧基化的碳纳米管(CNT)涂层于碳糊电极表面,制备了碳纳米管修饰电极,通过活化的羧基与末端带有氨基的目标DNA形成酰胺键以固定DNA,将羧基二茂铁(FCA)的羧基活化后,同样利用其与探针DNA氨基之间的作用,将其标记于DNA上,杂交后,用电化学方法测定标记上的FCA的量,从而定量测定DNA,检测限为3-3×10-11mol/L。 转基因植物产品的研究开发给人们的日常消费带来了更为广阔的选择空间,但其安全性问题也引起了人们的关注。如何对其进行简单、高效的检测成为研究的热点。结合电化学生物传感技术与分子生物学技术,可实现对转基因植物外源基因序列的测定。应用纳米材料可以大大提高检测的灵敏度。本论文将纳米材料应用于DNA电化学生物传感器的制备,并对转基因植物某些外源基因特定序列进行了检测。其主要工作如下: 利用PbSe纳米粒子和碳纳米管修饰碳糊电极,分别通过吸附法和共价键合法将单链DNA固定于修饰电极表面,通过扫描电子显微镜及电化学方法进行表征,结果表明修饰电极能够有效地固定DNA,且固定在修饰电极上的DNA保持着较好的杂交活性。 分别利用杂交指示剂亚甲紫(MV)、辣根过氧化物酶(HRP)标记和二茂铁标记的方法对转基因植物外源基因启动子CaMV35S序列片段进行杂交检测。结果表明指示剂检测法与标记检测方法对特定序列的检测均有较高的灵敏度和选择性,可以较好的识别目标序列,及与目标序列相关的两碱基错配序列和非互补序列。
其他文献
氧化型固醇被认为是动脉粥样硬化的主要致病因素之一。早期研究显示稀土离子La3+可预防动脉粥样硬化,但其相关机理还不清楚。本文以人脐静脉内皮细胞系ECV-304为对象,研究了L
聚羟基酸酯如聚乳酸(PLA),聚乙醇酸(PGA)和聚己内酯(PCI)等因其良好的生物相容性和可降解性在组织工程和药物缓释领域得到了广泛应用。但是这类材料因其亲水性差,缺乏可生物修
近年来,有关铁的危害性研究受到了越来越多的关注,其危害性主要集中在铁所导致的氧化损伤上。铁过载会导致肝、肾损伤,其损伤机理一般认为是铁催化产生活性氧,损伤蛋白质和脂质,从
添加剂强化铝酸钠溶液分解具有效果好、操作简单、成本低等优点,是一种具有工业应用前景的强化方法。本文选择2-辛基十二醇、十二醇、二十醇三种一元醇作为种分添加剂,在不同实
钌(Ⅱ)多吡啶类配合物由于其丰富的光化学、光物理性质以及其独特的与DNA结合能力,被广泛用于小分子配合物与DNA的相互作用研究。核酸作为生物体遗传信息的携带者,介入了生物的