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目的功能性消化不良(Functional dyspepsia,FD)是一种常见的无器质性病变的消化道症候群,其病因和病理机制错综复杂。Cajal间质细胞(Interstitial cells of Cajal,ICC)是胃肠道慢波活动的起搏细胞,可通过传递兴奋和抑制信号影响胃肠道动力。C-kit是胃肠道ICC的特异性受体,又称干细胞因子受体。干细胞因子(Stem cell factors,SCF)作为C-kit特异性配体与C-kit通过胞外结构域1-3区结合后激活的一系列信号分子,进而调节胃肠道中ICC的增殖、分化、发育和结构完整性。Cx43是存在于ICC细胞中与C-Kit存在共定位表达的缝隙连接蛋白,它的表达对胃肠运动障碍疾病有重要的病理生理学意义,Cx43表达的减少可以引起胃肠运动功能紊乱。由此,我们推测:温和灸可能通过SCF/C-kit通路介导的ICC的增殖与凋亡,改变ICC的超微网状结构、调节C-kit、SCF、Cx43的蛋白和m RNA表达,起到改善FD胃肠动力障碍的作用,本研究重点论述温和灸足三里穴作用于SCF/C-kit通路的作用机制。方法采用SPF级的健康成年SD大鼠50只,随机分为5个组:空白对照组、模型组、温和灸组、抑制剂组、温和灸+抑制剂组,每组10只。除空白对照组之外,其余4组均采用郭氏夹尾刺激法+不规则喂养+冰生理盐水灌胃的多因素干预方法造模。其中温和灸组造模成功后,用纯艾条在大鼠双侧足三里穴处施行温和灸,每处连续施灸30min,每天一次,共持续14天。抑制剂组在造模第5天,给予ACK2组腹腔注射Kit中和性抗体(ACK2),0.2mg/Kg,共持续14天。温和灸+抑制剂组在抑制剂组的基础上进行艾灸干预。治疗结束后HE染色观察各组大鼠胃窦组织形态结构特点;观察各组大鼠胃排空率的变化;利用透射电子显微镜(TEM)观察各组大鼠胃窦组织肌内ICC的超微结构变化Western blot法检测各组大鼠胃窦组织C-kit、SCF、Cx43的蛋白表达变化;Real-time RT-PCR检测各组大鼠胃窦组织C-kit、SCF、Cx43的m RNA表达水平变化。结果1.HE染色分析:各组大鼠的胃窦粘膜均无溃疡、糜烂,间皮细胞减少,无明显炎性细胞浸润或其他器质性病变的表现。2.各组大鼠胃排空率比较:与空白对照组比较,模型组大鼠胃排空率明显降低且有显著差异(P<0.01),说明说明FD大鼠构建成功,FD大鼠出现胃肠动力障碍。与模型组相比,温和灸组的大鼠胃排空率显著上调,差异有统计学意义(P<0.05),而抑制剂组和温和灸+抑制剂组的胃排空率与模型组比较无显著差异(P>0.05)。3.透射电镜观察:空白对照组肌内Cajal间质细胞呈现梭形,胞质致密,内质网线粒体丰富,延伸双极突起。模型组的Cajal间质细胞呈现梭形,与平滑肌细胞平行,但是突起延伸缩短,并未与附近的平滑肌细胞形成连接。温和灸组Cajal间质细胞形状发生改变,但是双极突出形态并未改变,且与附近的神经和平滑肌细胞形成缝隙连接。抑制剂组和温和灸+抑制剂组的Cajal间质细胞呈现梭形,突出延伸较模型组延长且形成了缝隙连接。4.胃窦组织SCF、C-kit、Cx43的蛋白表达水平比较:与空白对照组对比,模型组SCF、C-kit、Cx43的蛋白表达水平均明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组相比,温和灸组SCF、C-kit、Cx43的蛋白表达水平上调,差异有统计学意义(P<0.05),而抑制剂组和温和灸+抑制剂组的SCF、C-kit、Cx43的蛋白表达水平与模型组比较无显著差异(P>0.05)。5.胃窦组织SCF、C-kit、Cx43的m RNA比较:与空白对照组对比,模型组SCF、C-kit、Cx43的m RNA出现低表达,差异有有显著统计学意义(P<0.01=;与模型组相比,温和灸组SCF、C-kit、Cx43的m RNA表达水平上升(P<0.05=;而抑制剂组和温和灸+抑制剂组的SCF、C-kit、Cx43的m RNA表达与模型组比较无显著差异(P>0.05)。结论1.本研究发现温和灸足三里穴可以显著增加FD大鼠胃排空率,而这一作用在抑制剂ACK2干预下被逆转,提示温和灸足三里穴改善FD大鼠胃排空与胃肠ICC密切相关。2.通过温和灸足三里穴在一定程度上可以提高FD大鼠SCF、C-kit和Cx43蛋白表达和转录水平,增加ICC数量并改善ICC超微结构和功能,促进胃动力恢复。3.利用抑制剂ACK2特异性阻断SCF/C-kit信号通路,抑制剂组和温和灸+抑制剂组的SCF、C-kit和Cx43的蛋白和m RNA表达较模型组无明显差异,温和灸的促SCF、C-kit和Cx43的表达作用被抑制剂所拮抗,提示温和灸足三里通过调节SCF/C-kit信号通路进而改善FD胃肠动力。