蛋白磷酸酶2A催化亚基异构体在细胞自噬中的作用及其机制研究

来源 :广西医科大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:calvin1987
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目的:蛋白磷酸酶2A催化亚基α异构体(PP2Acα2)是近期发现的一种蛋白磷酸酶2A催化亚基α的剪切异构体。蛋白磷酸酶2A作为重要的蛋白磷酸酶贯穿各个层级的生命活动,参与调控了神经退行性疾病和肿瘤等疾病。由于其结构和功能十分复杂目前对其的研究仍有不少盲区。因此开展PP2Acα2的研究有利于阐明现有蛋白磷酸酶2A研究中的盲区。本研究以表达PP2Acα2的细胞株为研究平台,探寻PP2Acα2基因剪切触发条件和功能,以及其相关生命活动。方法:(1)通过分子克隆技术构建PP2Acα2的哺乳动物表达载体。(2)使用脂质体转染构建表达PP2Acα2的HEK293细胞。(3)使用流式细胞术检细胞周期和细胞凋亡,使用细胞计数法绘制细胞生长曲线。(4)通过蛋白免疫印迹实验检测PP2Ac、IGBP1、mTOR、和LC3等蛋白的表达情况。结果:(1)成功的构建了PP2Acα2的哺乳动物表达载体。(2)成功构建了表达PP2Acα2的HEK293细胞。(3)表达PP2Acα2的HEK293细胞的细胞生长曲线、细胞周期和细胞凋亡较对照组均无明显改变。(4)表达PP2Acα2的HEK293细胞的蛋白磷酸酶2A的蛋白表达量、磷酸化水平和去甲基化水平较对照组无明显改变,IGBP1蛋白表达量较对照组上升。(5)相较于对照组表达PP2Acα2的HEK293细胞的基础自噬水平下降,LC3蛋白的LC3Ⅱ/Ⅰ比值下降,mTOR蛋白的磷酸化水平上升。结论:(1)本研究成功的构建了PP2Acα2的哺乳动物表达载体。(2)本研究成功的构建了表达PP2Acα2的HEK293细胞。(3)本研究发现表达PP2Acα2的HEK293细胞基础自噬水平降低。
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