【摘 要】
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该研究运用蛋白质双向电泳和mRNA差别显示技术,从蛋白质和mRNA两个水平分离、克隆光敏核不育水稻育性相关基因,进而研究育性转换的分子机制.利用改进的双向电泳技术,研究人员
【出 处】
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中国农业科学研究院 中国农业科学院
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该研究运用蛋白质双向电泳和mRNA差别显示技术,从蛋白质和mRNA两个水平分离、克隆光敏核不育水稻育性相关基因,进而研究育性转换的分子机制.利用改进的双向电泳技术,研究人员系统地分析了农垦58S与其原始种农垦58营养生长期及生殖生长期、不同光周期条件下叶片全蛋白的双向电泳图谱,比较了蛋白质表达的动态变化.mRNA差别显示技术对分离光敏核不育水稻育性相关基因(环境敏感型)具有独特的优越性,表现为所需起材料少、可同时分析比较多种样品.针对研究材料的特殊性,研究人员在已有实验的基础上,对DDRT-PCR标准程序中的Mg<2+>浓度,模板浓度及其它反应条件进行了系统的比较分析,成功地建立了适于水稻幼穗及叶片mRNA差别显示的优化体系(起始RNA模板量为200-300ng;对下游锚定引物进行末端标记、采用双温程序进行差异cDNA片段的二次扩增、依据Sau3A Ⅰ酶切图谱至重组质粒归类).经多次重复实验证明,此优化体系具有分离效果好、条带清晰、重复性好等优点.利用该优化体系,对雌雄蕊形成期(Ⅳ)农垦58S和农垦58不同光周期处理的幼穗及叶片mRNA进行了差示分析,获得了7条差异cDNA片段.核苷酸序列测定及同源比较分析表明,RsL1与幼穗成熟、发育过程中一功能未知的cDNA EST同源性达99.2%;RsL3、RsL4则未发现同源序列,可能来源于新的未报道基因.
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