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随着纳米医学的快速发展与应用,基于纳米粒子介导的药物递送系统结合了治疗和诊断能力,为以肿瘤为靶点的癌症靶向治疗带来重大的研究价值。二氧化硅纳米粒子作为药物载体具有性质稳定、无毒、载药量高、生物相容性好等优异的性能在医学临床中具有巨大的应用潜力。尽管大多数纳米载体都是被动的,但基于分子识别如使用抗体或配体的主动靶向机制为靶向递送抗癌药物提供了高效的途径。基于此,我们合成了以二氧化硅纳米粒子为载体,叶酸分子为配体的叶酸功能化二氧化硅（SiO2-FO）靶向纳米药物载体。为了进一步推动该SiO2-FO靶向纳米药物载体在医学临床上的应用,有必要建立一个完整的剂量检测体系,为其应用于临床分析提供准确的剂量支持,进而控制临床用药的剂量与频率,从而达到最佳的治疗效果。因此,开发灵敏、高效和快速的SiO2-FO检测体系成为本论文的研究重点。本论文首先将合成的Si O2-FO作为半抗原与大分子蛋白质进行偶联成为免疫原,然后将其注射到大白兔体内制备出高特异性的抗体,以抗原和抗体为核心试剂,建立三种高灵敏、高选择性的免疫分析法对Si O2-FO进行痕量分析。具体工作如下:1.SiO2-FO抗原及其抗体的制备首先根据溶胶-凝胶法成功制备了SiO2-FO半抗原,并采用戊二醛交联法,将SiO2-FO与载体蛋白（BSA和OVA）分别进行偶联得到了兼具免疫原性和反应原性的免疫原（SiO2-FO-BSA）和包被抗原（SiO2-FO-OVA）。再将获得的SiO2-FO-BSA多次免疫新西兰大白兔,通过效价测定与筛选,最终得到了效价为1/128000的抗SiO2-FO多克隆抗体。2.抗原包被酶联免疫间接法定量分析SiO2-FO本实验基于抗原抗体反应的高特异性与HRP-羊抗兔IgG的放大信号作用,建立一种间接免疫法定量分析SiO2-FO。首先对实验中的反应条件进行优化,在最优条件下建立标准曲线,获得线性方程为A/Amax×100%=73–9.53logC(A和Amax分别为有标准品和没有标准品时的吸光度值,C为SiO2-FO浓度),其相关系数R2=0.998,线性范围为0.18104ng/mL,最低检测限(LOD,IC10)为16pg/m L,检测灵敏度(IC50)为258.8ng/m L,样品的加标回收率为97.3%111%,两种类似物的交叉反应率（CR）均不超过0.01%。实验结果表明了该方法选择性好、准确度高,适用于SiO2-FO的定量检测。3.FITC标记荧光免疫法测定SiO2-FO本实验以异硫氰酸荧光素（FITC）为探针与抗SiO2-FO抗体进行偶联,结合免疫分析的特异性与荧光的敏感性,开发一种FITC标记荧光免疫法定量检测SiO2-FO,并对实验中的反应条件进行优化,在最优条件下建立标准曲线,获得线性方程为（F–F0）/(Fmax–F0)×100%=68–10.61logC(F和Fmax分别为有标准品和没有标准品时的荧光强度值,F0为荧光背景值,C为SiO2-FO浓度),其相关系数R2=0.9991,线性范围为0.074104ng/mL,最低检测限(LOD,IC10)为8.4pg/m L,检测灵敏度(IC50)为50.12ng/m L,加标回收率为93.3%108.8%,两种类似物的交叉反应率（CR）均不超过0.01%。相较于酶联免疫间接法,该方法具有简单快速、灵敏度更高等优点,为SiO2-FO的定量检测提供了又一有效手段。4.包裹BODIPY聚合物纳米探针标记荧光免疫法测定SiO2-FO本实验以丙烯酰胺（AM）为单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯（EGDMA）为交联剂,偶氮二异丁腈（AIBN）为引发剂,氟硼二吡咯衍生物（BODIPY）作为荧光团,采用沉淀聚合法首次合成了一种发光强、光稳定性好、易于修饰的包裹BODIPY聚合物荧光纳米探针（BPFNP）,并将其标记上抗SiO2-FO抗体。利用BPFNP的光稳定性以及放大信号作用,建立一种高灵敏的SiO2-FO免疫学定量检测体系,并对实验中的反应条件进行优化,在最优条件下建立标准曲线,获得线性方程为（F–F0）/(Fmax–F0)×100%=58–12.63logC(F和Fmax分别为有标准品和没有标准品时的荧光强度值,F0为荧光背景值,C为SiO2-FO浓度),其相关系数R2=0.997,线性范围为0.018102ng/mL,最低检测限(LOD,IC10)为2.9pg/m L,检测灵敏度(IC50)为4.3ng/m L,加标回收率为91%104%,两种类似物的交叉反应率（CR）均不超过0.01%。与酶联免疫间接法和FITC标记荧光免疫直接法相比,该检测方法的灵敏度分别提高了60倍和12倍。结果说明该方法具有更高的灵敏度和更低的检测限,为SiO2-FO的痕量分析提供了一个灵敏而稳定的检测技术。