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背景和目的神经母细胞瘤(neuroblastoma, NB)是儿童时期最常见的恶性实体肿瘤之一,据研究他占新生儿恶性肿瘤的50%,其中90%的患者发病年龄小于10岁。现在一般认为其来源于胚胎神经峭的交感神经元,是由于肾上腺髓质中的交感神经源细胞向非嗜铬细胞转化过程受到干扰发生畸变而形成的,大部分患者的原发病灶位于腹膜后,但是也可以发生于纵膈、盆腔及颈部交感神经节中。神经母细胞瘤发病发病部位隐蔽,恶性程度高,早期诊断困难,易在早期发生转移。以往的研究表明Ezrin蛋白、CD44和E-钙粘素等细胞外粘附分子与肿瘤的发生发展密切相关。本实验应用免疫组织化学的方法检测不同病理阶段病例瘤体标本中Ezrin蛋白、CD44和E-钙粘素的表达,并且应用统计学方法进行数据分析,从而探讨Ezrin蛋白、CD44和E-钙粘素在小儿神经母细胞瘤发生发展中发挥的作用。材料和方法用免疫组化两步法(PV法)检测郑州大学第一附属医院2007年3月-2009年12月年经病理诊断为神经母细胞瘤病例共40例,其中男26例,女14例,年龄6个月-14岁,平均3.8岁。其中有淋巴结转移17例,肾转移5例,肝转移4例,腹腔内转移4例,骨髓转移18例。按国际神经母细胞瘤INSS 93分期标准将病例分为两组,其中局灶期(Ⅰ、Ⅱ期)病例19例,进展期(Ⅲ、Ⅳ)病例21例。按Shimada标准进行分期：FH型21例,U FH型19例。按照患儿年龄(A组：患儿年龄<1岁；B组：患儿年龄≥1岁)和性别进行分期。实验采用免疫组化两步法分别用兔抗人Ezrin (S539) Antibody(购自美国Bioworld Technology, Inc),鼠抗人CD44(V6)(购自北京中杉金桥公司)、E-钙粘素单克隆抗体(购自北京中杉金桥公司),两步法行免疫组化检测。PBS代替一抗作为阴性对照。以细胞浆或细胞膜呈棕黄色为阳性,根据阳性细胞数量及着色深浅判断染色强度。应用SPSS软件包进行统计分析,计数资料组间采用秩和检验和方检验α=0.05,相关性分析采用配对四格表资料两种处理效应的相关性分析,显著性水平α=0.05。结果1、Ezrin蛋白的表达与NB转移的关系Ezrin蛋白在NB中的表达明显高于正常肾上腺组织,其中在局灶期病例中的Ezrin蛋白表达为阳性的病例共15例,阳性率为78.9%,在进展期病例中Ezrin蛋白表达为阳性的病例共20例,阳性率为95.2%,经检验两者之间具有统计学差异(H=6.124,P=0.013)。在Shimada分期中,Ezrin蛋白在FH型表达为阳性的有15例,阴性5例,U FH型表达为阳性的有19例,经检验两者之间的差异具有统计学意义。(H=5.182,p=0.023)。2、CD44的表达与NB转移的关系研究发现CD44在正常肾上腺中的表达明显高于NB,局灶期病例中CD44表达为阳性的病例共12例,阳性率为68.1%,明显高于进展期病例的28.5%。经统计学检验,组间差异具有统计学意义。(H=4.950,P=0.026)。CD44在FH型表达为阳性的有13例,明显高于UFH型的5例,经检验两者之间差异具有统计学意义(H=4.496,P=0.034)。3、E-钙粘素的表达NB转移的关系研究发现E-钙粘素在正常肾上腺中的表达明显高于NB(p=0.027),其中局灶期病例中E-钙粘素表达为阳性的病例共11例,阳性率为57.8%,明显高于进展期病例的5例,经检验两组间差异具有统计学意义(H=5.455,P=0.020)。E-钙粘素在FH中表达为阳性的有11例。在U FH型中为5例,经统计学检验两者之间无明显统计学差异(H=2.754,P=0.097)。4、Ezrin蛋白、CD44和E-钙粘素的表达与年龄和性别的关系Ezrin蛋白在不同年龄在中表达具有统计学意义(H=4.354,P=0.037),而CD44和E-钙粘素虽然在年龄小于1岁患儿中的阳性表达率高于年龄大于1岁的患儿(CD44 58.3%：39.2%；E-钙粘素50.0%：35.7%),但经检验其差异无明显统计学差异。。Ezrin蛋白、CD44和E-钙粘素在不同性别组间的表达差异无统计学意义。5、Ezrin蛋白、CD44和E-钙粘素的相关性分析经统计学分析Ezrin蛋白的表达与CD44的表达呈负相关(χ2=4.675,P=0.031,r=-0.323)。Ezrin蛋白的表达与E-钙粘素蛋白的表达呈负相关(χ2=5.592,P=0.015,r=-0.351)。E-钙粘素蛋白的表达与CD44的表达呈正相关(χ2=6.077,P=0.014,r=-0.123)。结论Ezrin蛋白、CD44和E-钙粘素的表达与NB的转移有关,其中Ezrin蛋白可促进神经母细胞瘤的转移,而CD44、E-钙粘素则对其转移有抑制作用。年龄是影响Ezrin蛋白表达的因素之一,但不影响CD44和E-钙粘素的表达,而性别对Ezrin蛋白、CD44和E-钙粘素的表达没有影响。在NB的发生、发展过程中Ezrin蛋白与CD44之间,Ezrin蛋白与E-钙粘素之间可能存在负协同效应,而CD44与E-钙粘素之间则存在正协同效应。Ezrin蛋白、CD44和E-钙粘素可以协助临床医师对神经母细胞瘤进行分期和判断预后。