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移植物抗宿主病（GVHD）是同种异基因移植物中的免疫活性细胞（主要为T细胞），识别宿主抗原并对宿主产生的病理损伤状态。去除或灭活移植物中的T细胞可以将重症GVHD发生率从80％降至30％，但是移植失败率增加了20％，白血病的复发率提高了30％、感染率增加30％。显示了，移植物中的免疫活性细胞在移植后免疫和造血重建方面具有重要作用。新的发展方向是通过调节T淋巴细胞功能降低移植相关并发症和提高移植效果。 目的 通过体外训导的Ⅱ型T细胞（Th2、Tc2）移植，建立一种既降低急性GVHD又保留移植物抗白血病（GVL）效应的骨髓移植模式，并从杀伤细胞抑制性受体（KIR）/MHCⅠ识别角度探讨其分子机制，为GVHD的研究提供理论和实验依据。 方法 1.优势化Ⅱ型T细胞群的制备及其鉴定：体外在mIL-4（1000u/ml）、Ionomycin（5ug/ml）和ConA（5ug/ml）环境下，把C57BL/611-26鼠T淋巴细胞（CD4+、CD8+）训导为可产生Ⅱ类细胞因子IL-4的Th2和Tc2细胞群。分别采用夹心酶联免疫法（ELISA）和流式细胞仪（FCM）检测该细胞群产生IL-4的能力。 2.优势化Ⅱ型T细胞表达KIR（Ly49C、Ly49A）及其功能研究：用抗亲和素－生物素－过氧化物酶复合物法（ABC）和原位分子杂交组织化学OSHH)检测 Ly49A和 Ly49C的表达；用混合淋巴细胞反应（MLR）和 MTT方法分析调节 Ly49C对优势化的 T淋巴细胞增殖和对白血病杀伤活性的影响。 3．建立半相合同种异体骨髓移植的急性GVHD模型：以亲代C57BL／6”Ib鼠为供者，以 BALB／c X B6，F；”‘“（CB6F卜为受者，预处理条件为全身照射（TBI，60C。照射 9刀Gy人进行 T淋巴细胞混合骨髓细胞移植，建立急性GVHD模型。 4．建立半相合红白血病模型：把可移植的 H＜遗传背景的 EL96红白血病细胞静脉接种给CB6F；付川“鼠，建立F；汁’“红白血病模型，以观察GVL效应。 5．优势化＊型T细胞混合骨髓细胞移植对GVHD和GVL的影响：把体外训导的 C57BL伍卜比来源的 ThZ、To2细胞与其骨髓细胞按 10：ILb例K 10’11型 T细胞：SX 106骨髓细胞）混合后，移植给经过 TBI预处理的半相合的正常和荷红白血病CB6F；卜ZWh受鼠，以生存期、病理学改变等指标评价移植效果。同时，观察 Ly49A、Ly49C在 GVHD发生鼠表达状态，探讨KIR表达与GVHD或GVL的关系。 结果 1．在mIL叶、ConA和Ionomycin环境下体外培养4天即可使静息淋巴细胞mIL－4的分泌水平由低于20ug／ml提高到833．33土28．73u旮ml。优势化＊型 T细胞膜 mIL＊表达由 6．8土 1．2％提高到 29．3士 5．4％…wt0．of）。 2．优势化的＊型 T淋巴细胞的 Ly49CmRNA表达阳性率为 25．6士6．2％(静息T细胞＜3％卜 Ly49A的膜表达为22．5士4．9％(静息T细胞＜5％卜 FCM检测结果显示：Ly49C在＊型 T细胞表达阳性率 29．8 ．4－土4．3％，其中 CD／细胞表达阳性率为 10二土0．9％、CDS”细胞阳性表达率为 17．8土 l．3o。抗 Ly49C 单克隆抗体（5E6）可以使C57BL／6H二b．BALB／C””’‘之阳单向MLR和双向MLR的增衍活性分别提高ZI．5土3．4％和 13．8土1石％。5E6抗体使C57BL／6鼠＊型T细胞对EL9611细胞的杀伤活性提高 47．2土 8．5o。 3·所建立的半相合急性GVHD模刑(C57BL旧”二‘一CB6FI”2＼具有 100O发生 GVHD、死于 GVHD的时间集中在 17．2土 3．4天、病理表现典型等。 4CB6F；H“Zdlb红白血病模型己传 4代，静脉接种＊即可发病。发病时白血病细胞主要浸润肝、脾和骨髓。在每只鼠接种 10‘1’EL96ll细胞间，生存时间与接种细胞数成线性负相关（，－0．972）。 5．在半相合的GVHD模型(C57BL沁“工‘－CB6FI”屯d／、中 GVHD发生组的平均生存时间为 17刀 f 5＊ 5天，优势化＊型T细胞移植组GVHD发生时间延迟、程度减低，生存时间为 50刀土门二7天（Pwto刀5）。 6．在亢全异基因移植中（C57BL／6卜2‘一BLAB儿卜Zd），未进行移植的白血病对照组生存期10石土1．3天、环磷酚胺治疗组生存期18．7土4．2天、11型 T细胞混合骨髓细胞移植组生存期为 36．9士 10．8人（P＜0刀5）。在半相合异基因优势化11性细胞移植中（C57BL历”－Zb、CB6Flll－Zd／b），未进行移植的白血病对照组生存期为12．3士2．8大、环磷酚胺治f组生存期为 17＊土 2石天、11型 T细胞混合骨髓细胞移植组生存期为 45刀土27．7天（p＜0．05），其中6／10只生存大于60天。 7．GVHD发生鼠的脾 T细胞中 Ly49A阳性表达细胞占 3．4士 1．l％、Ly49CmRNA阳性表达细胞占9．6土1石％。无GVHD发生鼠的脾T细胞中 Ly4gA阳性表达细胞为 22．5土3．8％(p＜0．ofL Ly49CmRNA”细胞为32．8土6．3％（prto．of）。 ·5－ 小结 1本研究所建?