山猪Myf5基因SNPs筛查及SNPs组合对三种肉质性状的影响

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猪肉作为当今世界人们生活最主要的肉制品来源,其肉质品质及肉质安全问题越来越受人们的重视。我国是世界上第一猪肉生产国与消费国,猪肉产量和消费量占世界总产量和总消费量的一半左右,人们的饭桌上几乎离不开猪肉。而猪肉的肉质性状是由多基因控制的复杂的复合性状,受到多种肉质基因的共同影响,而单个基因的影响又是通过其碱基序列的突变而产生的。Myf5是生肌调节因子家族(MRFs)的成员之一,控制早期肌肉的分化,是影响肉质的候选基因之一。早期对Myf5的多态性的研究多为研究基因部分片段的部分SNPs与肉质的相关性,却很少有扩增Myf5基因全长,研究所有SNPs及其组成的单倍型对肉质的影响,并且在山猪这个特殊的地方猪种中更没有系统的分析研究。本研究对不同山猪血统的猪种的部分肉质性状进行检测,并在之前Myf5基因研究的基础上,利用PCR-SSCP扩增Myf5全部的外显子片段,找出Myf5基因编码序列上所有的突变位点,对Myf5的全部外显子进行多态性分析,并利用SPSS statistics16.0分析单个SNP及SNPs组成的单倍型对部分肉质性状的影响,同时采用荧光定量PCR检测不同样本背最长肌的Myf5基因表达量,并分析不同基因型,单倍型个体之间的Myf5基因表达差异,进而研究单个突变点以及多个突变点与该基因表达量及肉质性状相互之间的潜在关系。Myf5基因多态性研究结果表明不同的山猪血统以及不同猪种在剪切力和蛋白质上有显著差异(p<0.05),不同的性别的猪个体之间肉质差异不显著(p<0.05);在Myf5基因的第一个外显子内检测到两个SNPs,即:355bp处的A→C的突变,引起第77个氨基酸的错义突变(Met→Leu),形成两种基因型(AA型和AC型),438bp处的G→C的突变,引起第104个氨基酸的同义突变(Leu→Leu),形成两种基因型(GG型和GC型),两个突变位点均未发现纯合的突变型;形成的基因型以及单倍型在不同猪种中的分布均有显著的差异(p<0.05)。其中A/C突变位点对蛋白质影响显著(p<0.05),G/C突变位点对蛋白质影响不显著(p>0.05);A/C和G/C突变位点单独对剪切力的影响均不显著(p>0.05),组成的单倍型M-S(两个位点均突变)对剪切力影响显著(p<0.05),表明两个突变位点的互作会产生出新的遗传效应。三种单倍型A-G(两个位点均未突变),A-S(仅第二个位点突变)和M-S(两个位点均突变)在纯种山猪与杂种山猪中的分布存在明显差异;M-S单倍型不仅对蛋白质的影响显著(p<0.05),对剪切力的影响亦显著(p<0.05)。荧光定量PCR检测结果表明不同猪种的Myf5表达量存在显著差异(p<0.05),但是不同性别的猪个体该基因表达量差异不显著(p>0.05),多态性对MyfS基因的表达量影响也不显著(p>0.05);在Myf5基因表达量与肉质性状的相关性方面,我们发现表达量与蛋白质的含量呈显著的正相关,说明Myf5基因表达的增强能有利于蛋白质含量的增加,而与剪切力与胴体重无显著的相关性。本研究鉴定出Myf5基因中与肉质相关的SNPs及单倍型,并建立了该基因基因型与单倍型的检测方法,另外分析了Myf5基因的不同基因型单倍型在猪种群内及种群间的分布情况,以及Myf5基因多态性与表达水平等对部分肉质的作用及影响,为进一步研究其他候选基因的遗传效应奠定了基础。
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