卵巢恶性肿瘤是女性生殖器三大恶性肿瘤之一，五年存活率仍较低，徘徊在25-30％。化疗是除手术外最重要的治疗手段，传统一线化疗方案是铂类(顺铂，卡铂)和紫杉醇联合方案，但铂类药物的耐药使得人们对更多抗肿瘤药物倾注了很大的兴趣。拓扑替康就是最近的热点之一，已经被美国FDA批准用于小细胞肺癌和卵巢癌，金喜素是国产盐酸拓扑替康。盐酸拓扑替康是拓扑异构酶-Ⅰ抑制剂，通过影响拓扑异构酶-Ⅰ的正常功能来抑制快速分裂细胞的复制，其细胞毒作用是在DNA合成中，是S期细胞周期特异性药物。通过与Topo-Ⅰ-DNA可裂解复合物可逆结合，形成CPT-Topo-DNA三元复合物，干扰复制叉的进行，导致复制停止，从而导致细胞的死亡。卵巢癌细胞系SKOV3是顺铂耐药细胞系。本研究拟与顺铂比较研究盐酸拓扑替康对卵巢癌细胞系SKOV3诱导凋亡作用，及凋亡重要相关蛋白p53和bcl-2的表达情况。MTT比色法测定盐酸拓扑替康对SKOV3细胞体外生长的抑制作用，观察到盐酸拓扑替康对SKOV3生长呈明显的剂量依赖性影响，作用24小时后50％抑制浓度(IC50)为588ng／ml。拓扑替康对卵巢癌细胞SKOV3的抑 库撇丈学硕全学夕z珍丈制作用为临床用药的基础，特别是对于铂类耐药的进展性卵巢癌患者不失为一个很好的选择，而且有相当的支持条件下加大剂量可以增强它的治疗效果，因此寻求其最大有效剂量一直是人们不懈努力的方向。盐酸拓扑替康作用后SKOV3细胞电镜下出现凋亡和坏死两种改变，一个证实了它可以诱导细胞凋亡，再者提示拓扑替康对细胞作用也产生坏死改变，而坏死可以使抗肿瘤作用方式，也是临床上引起毒副作用的原因，应该尽量克服。相差显微镜下观察到盐酸拓扑替康作用后随时间改变细胞逐渐出现了细胞死亡的形态改变，也说明了其对卵巢癌SKOV3细胞有较强的作用。经盐酸拓扑替康和顺铂处理的爬片细胞经过HE染色后在高倍镜下观察部分细胞呈现典型的凋亡形态改变，做凋亡计数计算凋亡比率。结果两药处理的细胞的凋亡比率都比对照组高(P<0.01)，随作用时间延长，两组凋亡比率均升高，在盐酸拓扑替康与顺铂作用16小时后，两组凋亡比率比较差异无显著性(p>0.05)，作用至24小时和30小时，盐酸拓扑替康组>)l项铂组，两者差异有显著性(24小时p<。.05和30小时p<0.01)，因此可以看出盐酸拓扑替康对SKOV3细胞作用至少与顺铂相当，24小时以后强于顺铂。而且 片袱才学硕全笋世不玲丈其抗肿瘤作用机制特殊，与一线化疗药物铂类和紫衫醇无交叉耐药且在体外实验中有协同作用，故很多研究在将拓扑替康作为一线化疗联合用药的成员。尸53和bCI一2基因是抗癌药物诱导细胞凋亡过程中重要的调节基因，前者是正调节，后者则抑制凋亡发生。本实验中以盐酸拓扑替康和顺铂处理SKOV3细胞，免疫组化测两种蛋白表达，结果加药的两组p53蛋白表达率均比对照组高(P<0.01)，bcl一2在盐酸拓扑替康组与对照组差异无显著性(P>.05)，在顺铂组表达比对照组低 (P<0.01)。由此我们可以认为p53凋亡途径是拓扑替康抗癌作用的一个主要方面，与顺铂有着共同的作用途径。但本实验也观察到p53蛋白表达在拓扑替康和顺铂有很大差异(盐酸拓扑替康42.8士2.44%VS顺铂52.1士4.79)，又提示拓扑替康有不依赖于p53的诱导凋亡途径，或可以通过凋亡以外的途径引起细胞死亡。本实验中未观察到盐酸拓扑替康作用后bcl一2蛋白表达与对照组出现统计学意义的差异，而顺铂bCI一2表达比对照组低，提示bCI一2在盐酸拓扑替康诱导凋亡中未起到抑制作用，而在顺铂中其降低则减弱了对凋亡抑制的作用。综上，通过本实验可以认为盐酸拓扑替康对卵巢癌细胞系 昔;从才笋硕生一学左老丈SKOv3体外生长有明显的剂量依赖性抑制作用:抗肿瘤作用主要通过诱导细胞凋亡;其诱导SKOV3细胞凋亡的作用至少与顺铂相当，24小时后强于顺铂，盐酸拓扑替康可通过p53诱导凋亡，bCI一2在盐酸拓扑替康诱导卵巢癌细胞系SKOV3凋亡中未起到抑制作用。