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色泽作为果实重要感官性状,影响其商业价值。全红型猕猴桃因色泽鲜亮而深受消费者喜欢,其果实红色的显现是由于花色苷的积累,花色苷合成机理非常复杂,受内源基因和外界环境的双重影响,其中,光是影响果实色泽形成的主要因素之一,因此,开展猕猴桃果实响应光照的花色苷合成机制的研究尤为重要。然而,目前相关研究主要集中在苹果、梨等作物上,猕猴桃中相对较少。本研究对软枣猕猴桃‘天源红’盛花后30 d果实进行套袋处理,不套袋果实作对照。以盛花后8个时期(盛花后30 d、50 d、70 d、80 d、90 d、100 d、110 d、120 d)的果肉样品为试材,结合前期转录组和小RNA测序结果,探索光照对软枣猕猴桃红肉性状形成的影响机制,主要研究结果如下:(1)通过对2种处理8个时期果肉样品的表型、色泽比、色度角及5种花色苷组分(矢车菊素、飞燕草素、矢车菊色素-3-O-半乳糖苷、飞燕草色素-3-O-半乳糖苷、矢车菊色素-3-O-木糖-半乳糖苷)的定性和定量分析发现,‘天源红’果肉中的主要花色苷组分为矢车菊素-3-O-半乳糖苷和矢车菊素-3-O-木糖-半乳糖苷,套袋处理主要通过抑制矢车菊素-3-O-半乳糖苷的合成阻碍果肉中花色苷的合成与积累。因此,生产中,应严格整形修剪,确保通风透光,促进架面下所有果实正常着色。(2)根据前期‘天源红’不同发育时期果肉转录组测序结果筛选了与果肉着色相关的14个转录因子基因。通过表达量趋势及其与矢车菊素-3-O-半乳糖苷和矢车菊素-3-O-木糖-半乳糖苷含量的相关性分析,发现MYB1和MYB110可能是调控‘天源红’果肉花色苷合成的关键基因,其中,MYB1响应套袋处理,作为光响应因子参与花色苷的合成。从‘天源红’果肉中克隆AaMYB1,其编码区全长810 bp,编码269个氨基酸。通过与中华猕猴桃和其他物种中的花色苷合成相关的转录因子进行蛋白序列比对发现,AaMYB1含有R2R3保守结构域,属于R2R3-MYB转录因子。构建融合表达载体35S::AaMYB1-GFP之后转化农杆菌EHA105并瞬时转化本氏烟草叶片,结果显示,AaMYB1定位于细胞核,具有转录因子的一般特征,可以在植物细胞内发挥转录激活特性。进一步以软枣猕猴桃组培苗的嫩叶作为外植体,侵染后发现,过表达AaMYB1的愈伤组织有红色斑点,而野生型并未出现红色斑点。因此,推测AaMYB1参与调控猕猴桃中花色苷的生物合成。(3)通过对花后70 d(转色前期)、100 d(转色期)和120 d(成熟期)的‘天源红’果肉样品进行miRNA测序,得到7,364,610条Unique序列,大部分序列长度范围为20-24 bp,其中24 bp长度的序列所占比例最大。通过一系列的筛选确定,最终得到1,063个miRNAs,包括482个保守miRNAs和581个新型miRNAs。对不同时期样品进行差异表达分析,并结合基因功能注释,最终确定‘天源红’果肉花色苷合成相关的8个候选miRNAs。通过对其在两种处理、三个时期果肉样品中的表达量及其与花色苷主要组分含量的相关性进行分析,推测miR393、miR828、miR396和miR156正调控花色苷的合成,miR167和miR858负调控花色苷的合成,其中miR396和miR156受到套袋处理的影响,作为光响应因子参与‘天源红’果肉花色苷的合成,为后续研究miRNA介导的软枣猕猴桃果实花色苷合成的光响应机制提供参考。