两株拮抗细菌防治黄瓜枯萎病的研究

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1.两株拮抗细菌最大抗菌活性培养条件的优化利用管碟法对本实验室筛选出的两株具有广谱生防潜力的拮抗菌M22BH3(Bacillussubtilis M22BH3)、17(Bacillus amyloliquefaciens 17)无细菌滤液进行最大抗菌活性培养条件的优化,确定了生防菌M22BH3在LB培养基、30℃、pH8的条件下培养其滤液抗菌活性最强;17菌株在NA培养基、45℃、pH7培养条件下滤液具最大抗菌活性。在培养基中加入促芽孢生长的尿素、土壤浸汁、马铃薯淀粉及金属离子,M22BH3、17菌株滤液抗菌活性未见提高,这与报道的芽孢杆菌产抗菌代谢物情况存在明显差异,抗菌物质的产生与芽孢形成之间没有相关性。2.两株拮抗细菌室内及大田条件下对黄瓜枯萎病的影响研究发现菌株M22BH3无菌滤液对黄瓜种子的萌发有抑制作用,处理的种子萌发率为48.33%,低于阳性对照近20%;17菌株滤液处理的黄瓜种子,萌发率为75%,明显高于阳性对照,对种子的萌发有促进作用。室内培养通过对种子浸种、秧苗灌根及两种方法同时采用发现:17菌株无菌滤液两种方法同时采用对黄瓜枯萎病的防治效果较好,防治效果达69.05%,明显高于对照,M22BH3菌株无菌滤液防治效果不明显;同时对两菌株无菌滤液作用秧苗14d和28d跟踪,发现17菌株无菌滤液处理发病率上升的幅度较小,防治效果较稳定性。大田试验结果与室内结果相一致,17菌株无菌滤液对黄瓜枯萎病的防治效果较好,防治效果高达70.7%,高于阳性对照近10%,并且经过17菌滤液处理的黄瓜种子,其地上部分的植株生长旺盛、健壮,叶片呈深绿色;M22BH3菌滤液各处理对黄瓜枯萎病的防治效果较对照农药未见显著差异。3.两株拮抗细菌安全性测定研究发现,M22BH3、17菌剂处理对昆明小鼠急性经口LD50均大于5000mg/kg,属低毒类;急性经皮LD50大于2000 mg/kg,亦均属低毒类;对豚鼠皮肤刺激平均指数72h后为0,皮肤刺激强度为无刺激性;对兔眼刺激平均指数48h后为0,眼刺激强度为无刺激性;皮肤变态反应(致敏)试验中,经过多次致敏和激发两菌剂均未引起对封闭群豚鼠皮肤的致敏反应,致敏率为0,属Ⅰ级弱致敏物。
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