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第一部分2型糖尿病脂肪细胞内NF-κB及胰岛素信号传导分子活性的实验研究目的观察2型糖尿病及非糖尿病脂肪细胞内NF-κB及胰岛素信号传导分子活性的差异。方法取2型糖尿病患者(2型糖尿病组)及非糖尿病患者(非糖尿病对照组)腹部皮下脂肪组织进行原代培养,用免疫沉淀法及蛋白印迹法(western blot)检测两组脂肪细胞内胰岛素刺激后胰岛素信号传导分子IRS-1酪氨酸磷酸化及AKT-Ser473磷酸化程度,用电泳迁移率变动分析(EMSA)测定两组脂肪细胞内NF-κB的DNA结合活性。结果2型糖尿病组脂肪细胞内胰岛素刺激后IRS-1酪氨酸磷酸化及AKT-Ser473磷酸化水平明显低于非糖尿病对照组,两组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。2型糖尿病组脂肪细胞内NF-κB的DNA结合活性明显高于非糖尿病对照组,两组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论2型糖尿病脂肪细胞内存在胰岛素抵抗和NF-κB的过度活化,而NF-κB的过度活化可能在2型糖尿病脂肪细胞胰岛素抵抗的发生、发展中起着重要作用。第二部分NF-κB转录诱捕分子对脂肪细胞胰岛素抵抗的抑制作用研究目的观察NF-κB转录诱捕分子(NF-κB decoy)对2型糖尿病脂肪细胞内NF-κB及胰岛素信号传导分子活性的影响。方法用脂质体瞬时转染法将NF-κB decoy分子转入2型糖尿病脂肪细胞内,用免疫沉淀法及蛋白印迹法(western blot)检测转染NF-κB decoy分子后脂肪细胞内胰岛素刺激后胰岛素信号传导分子IRS-1酪氨酸磷酸化及AKT-Ser473磷酸化程度的变化,用EMSA测定转染NF-κB decoy分子后脂肪细胞内NF-κB的DNA结合活性的差异。结果转染NF-κB decoy分子后2型糖尿病脂肪细胞内胰岛素刺激后胰岛素信号传导分子IRS-1酪氨酸磷酸化及AKT-Ser473磷酸化水平较转染前有明显升高,两者比较,差异有统计学意义(P<0.01)。转染NF-κB decoy分子后2型糖尿病脂肪细胞内NF-κB的DNA结合活性较转染前明显降低,两者比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论2型糖尿病脂肪细胞的胰岛素抵抗与NF-κB的过度活化有关,通过NF-κB decoy分子抑制NF-κB的过度活化能部分逆转胰岛素抵抗。