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目的:本研究在中医活血化瘀理论及细胞疗法新技术指导下,探讨益气活血方和行气活血方联合输注内皮祖细胞(EPC)对大鼠血管内皮功能障碍的修复作用及其机制。方法:以内皮损伤的SD大鼠为受试对象,选择益气活血之补阳还五汤、行气活血之血府逐瘀汤为被试因素,研究两方分别联合EPC输注后,对大鼠内皮损伤模型血管内皮损伤的修复作用。在明确两方能促进EPC修复损伤血管内皮的基础上,从诱导EPC归巢和促进分化两方面,以SDF-1/CXCR-4轴、整合素分子αvβ3、αvβ5及PI3K/Akt信号通路为切入点,研究两类活血方促进EPC修复受损血管内皮的作用机制。结果:1.采用优化密度梯度离心法获取EPC,对7d、14d、21d的细胞表面标志物CD34/CD133进行检测,结果显示双抗的表达率分别为16.9%、22.6%、19.71%。采用DAPI标记结果显示EPC的标记率达到95%以上。2.SD大鼠高脂饲料喂养3个月,辅以维生素D腹腔注射可造成大鼠血脂升高,血管内膜增厚,部分可见血管呈粥样硬化样改变,细胞衰老检测血管内皮有阳性表达。药物干预4周后,与模型组比较,各实验组细胞衰老情况均有改善,补阳还五汤联合EPC组、血府逐瘀汤联合EPC组和单独输注EPC组改善尤为明显,内皮衰老检测为阴性。3.与M组比较,b、y及B、E组均有下调总胆固醇及甘油三酯的作用(P<0.05);b、y及B、E组均能上调高密度脂蛋白的水平。与E组比较,b、y及B、E组在下调总胆固醇及甘油三酯的作用显著(P<0.05)。与单用药物组比较,B、E组能下调甘油三酯的表达,上调高密度脂蛋白表达(P<0.05)。与C组比较,M组的血钙浓度显著增加(P<0.01);各药物组与M组比较血钙浓度显著降低(P<0.05);E组与B、X组相比,后者血钙下降更为明显(P<0.05)。两方单用相互比较,在调节甘油三酯和高密度脂蛋白方面,b组作用不及y组(P<0.05),但两方联合EPC后在调节血脂和血钙方面,B组的作用亦整体优于X组,特别是在下调总胆固醇、甘油三酯和上调高密度脂蛋白方面具有统计学意义(P<0.05)。补阳还五汤与EPC在调节总胆固醇方面具有相加作用;在调节高密度脂蛋白和甘油三酯方面,两类活血方联合EPC有协同作用。4.与M组比较,各实验组eNOS表达均显著提高,其中B、X、E组表达显著增强(P<0.01),b、y组表达增强(P<0.05)。与E组比较,两类活血方联用EPC组的eNOS蛋白水平增加明显(P<0.05)。与单用药物组比较两类活血方联用EPC组eNOS蛋白水平显著提高(P<0.05)。补阳还五汤、血府逐瘀汤在上调eNOS表达方面与EPC具有相加作用。5.与M组比较,B组SDF-1蛋白表达显著增加(p<0.01),X组SDF-1蛋白表达有所增加(p<0.05);与E组及单用中药组相比,B、X组SDF-1蛋白表达增加(p<0.05或p<0.01);与C组比较,M组及其余各实验组CXCR4的表达均有所下降(p<0.05),与M组比较各实验组CXCR4的表达无显著性差异。两方单用相互比较无显著差异,但联用EPC后,B组上调SDF-1蛋白的作用显著高于X组(p<0.05)。在上调血管SDF-1的表达方面,补阳还五汤联合EPC具有协同作用,血府逐瘀汤联合EPC具有相加作用。6.与M组比较,各组αvβ3的表达增加(p<0.05),其中B组显著增加(p<0.01);与E组比较,单用两类活血方组αvβ3降低(p<0.05);与b组比较,B组αvβ3的表达增加(p<0.05)。与M组比较,各实验组αvβ5的表达增加(p<0.05),但各实验组之间的比较无差异(p>0.05)。两方单用相互比较差异不大,但联用EPC后,B组在上调αvβ3的表达方面显著优于X组(p<0.05)。在调节αvβ3的表达方面,补阳还五汤联合EPC具有相加作用。7.与M组比较,b组、B组、X组PI3K蛋白表达增强(p<0.05);与单独药物组比较,B、X组PI3K蛋白表达增强(p<0.01或p<0.05);与E组比较,B、X组PI3K蛋白表达增强(p<0.05)。与M组比较,各实验组p-AKT表达增强(p<0.05或p<0.01);与E组比较,B、X组p-AKT表达显著增强(p<0.01);与单用两类活血方组比较,B、X组p-AKT表达显著增强(p<0.01)。两方单用相互比较,b组在上调PI3K蛋白表达方面略高于组(p<0.05),但两方联用EPC后比较无差异。补阳还五汤和血府逐瘀汤联合EPC在上调PI3K、磷酸化Akt蛋白方面均有协同作用。结论:1.优化后的密度梯度离心法能成功获取EPC,原代培养14天的EPC细胞为输注的最佳时机,EPC用DAPI标记可进行长效示踪。2.两类活血方能显著促进EPC修复损伤的血管内皮。两方比较补阳还五汤的修复作用优于血府逐瘀汤。3.补阳还五汤和血府逐瘀汤一是可通过上调SDF-1和avβ3的表达促进EPC的归巢,二是可通过激活PI3K/Akt信号通路,促进EPC分化与增殖,从而达到修复损伤血管内皮的作用。