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目的将HIF-1α基因稳定转染至牙髓干细胞(DPSCs)中,运用基因工程技术,检测HIF-1α基因诱导DPSCs在体外的成血管分化的作用。方法对HIF-1α进行402、564、和803位点的基因突变,使其在常氧状态下实现稳定表达并且能够保持高度活性,构建突变型、野生型以及对照组的慢病毒载体;体外培养DPSCs;分别用3种慢病毒转染DPSCs后,检测细胞转染效率、目的基因HIF-1α在m RNA及蛋白水平的表达,MTT检测慢病毒载体对细胞增殖的影响;目的基因转染成功后,分别于0,1,4,7,14,21天收集细胞,q PCR、Western blot法检测HIF-1α调控DPSCs成血管相关因子的基因和蛋白表达情况,并比较三种慢病毒载体对DPSCs作用的区别。结果DPSCs转染病毒MOI值设定为10 pfu/cell,转染病毒7 d后,倒置荧光显微镜观察病毒转染效果最好,此时转染效率达90%以上。MTT结果表明突变组和野生组吸光值高于对照组,而突变组又大于野生组,HIF-1α基因还有促进DPSCs增殖的作用。通过q PCR和Western blot的检测方法从基因和蛋白水平验证了目的基因HIF-1α的成功表达。目的基因转染成功后,分别于0,1,4,7,14,21天收集细胞,q PCR、Western blot法检测结果显示HIF-1α能够上调DPSCs成血管相关因子(VEGF、SDF-1及Ang-2)的基因和蛋白表达(P<0.05)。突变组和野生组的成血管作用明显强于对照组(P<0.05),而突变组又优于野生组(P<0.05)。结论本实验在体外从基因和蛋白水平检测并证明了HIF-1α能够诱导DPSCs促血管生成因子(VEGF、SDF-1及Ang-2)表达的增加。初步证实了HIF-1α基因可以促进DPSCs血管向分化作用。