目的：探讨同时检测艰难梭菌毒素A基因,毒素B基因和二元毒素基因的多重PCR方法,研究临床分离的艰难梭菌的毒素基因类型。方法：根据美国2010年艰难梭菌感染临床实践指南的标准,选取住院的腹泻患者；收集2013年6月至2014年5月期间,北京协和医院的160例住院腹泻患者的粪便标本,用艰难梭菌选择性培养基CCFA分离培养艰难梭菌；用VITEK-MS质谱仪进行菌种鉴定；采用酶免夹心与终点荧光检测相结合技术(ELFA),检测这些粪便标本中艰难梭菌毒素A/B,并分析其毒素特征；将艰难梭菌纯培养出的菌落用多重PCR方法测定艰难梭菌的毒素A基因、毒素B基因和二元毒素基因。结果：收集的160例腹泻患者粪便标本中,分离培养出37株艰难梭菌,细菌分离率达23.1%。33例粪便标本检测艰难梭菌A/B毒素阳性,其中28例分离培养并鉴定出艰难梭菌； 127例检测艰难梭菌A/B阴性的粪便标本中,有9例分离培养并鉴定出艰难梭菌。应用免疫学方法检测毒素检出率为75.68%(28/37)。用多重PCR方法,在37株分离的艰难梭菌中,36株检出A/B毒素基因,检出率为97.3%,基因呈2种分布类型：35株含tcdA+,tcdB+,cdtA-/cdtB-；1株含tcdA+,tcdB+, cdtA+/cdtB+结论：本研究中分离的艰难梭菌多为产毒株；多重PCR方法可以快速地一步筛选艰难梭菌的毒素基因：毒素A基因,毒素B基因和二元毒素基因,毒素基因型主要是tcdA+,tcdB+,cdtA-/cdtB-,未发现tcdA-,tcdB+的菌株。