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脑膜炎是由脑膜炎奈瑟氏菌引发的世界性传染病,具有高致死率、高传染性等特点,尤其对6个月至2周岁的婴儿具有极大易感性,即使痊愈也会留下永久性的神经后遗症。目前防治脑膜炎最有效的方法仍是接种疫苗。针对5种主要的致病血清型,已开发并批准了4种荚膜多糖结合疫苗的使用,即A、C、W和Y等四种。但血清型B的脑膜炎球菌因其多糖结构与人体组织的唾液酸同源,无法引起免疫反应,故缺乏有效的多糖疫苗。以fHbp为主要候选抗原的出现,为预防和控制B型脑膜炎(Men B)疫苗的开发和利用提供了一条有效的途径。本研究利用基因工程手段,从温州医科大学第一附属医院的一例B型脑膜炎患者中分离了一株Men B毒株中克隆fHbp基因,经生物信息学分析后构建原核表达载体p ET-22b-fHbp。热激法转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,获得工程菌。确定当诱导温度为37℃,诱导剂IPTG的浓度为500m M,诱导时间为8hr的条件下,外源蛋白fHbp表达量达到最大值,约为总可溶性蛋白的20%,且为可溶性蛋白形式。经Ni2+Sepharose Fast Flow亲和层析纯化后获得了大肠杆菌表达的fHbp纯品,命名为E-fHbp。针对拟南芥密码子偏好性,对fHbp基因序列进行优化设计和化学合成。构建以菜豆Pha P启动子驱动密码子优化后的fHbp基因的植物表达载体p Pha P3301-rfHbp。利用农杆菌介导的沾花侵染法转化拟南芥,经浓度为1%的除草剂Basta筛选后共计获得300余株抗性植株,金标免疫试纸条(PAT/bar试纸条)检测结果288株阳性植株。进一步对抗性植株中的rfHbp基因进行PCR鉴定,共计获得87株阳性植株。对全部87株T1代转基因拟南芥种荚中的目的蛋白进行ELISA检测,筛选出5株fHbp表达量在0.1%以上的转基因株系。Southern检测表明,r HF-10、r HF-22和r HF-54三个植株为单拷贝插入,而Western和ELISA检测表明,r HF-22中目的蛋白的表达量最高为种子总可溶蛋白的0.349±0.072%。经Ni2+Sepharose Fast Flow亲和层析纯化,获得了植物源fHbp蛋白纯品,命名为A-fHbp。将上述实验中获得的不同来源的fHbp蛋白进行免疫实验,通过腹腔注射接种E-fHbp和A-fHbp,比较了两种不同来源的候选疫苗的免疫原性差异,结果表明E-fHbp与A-fHbp诱导血清特异抗体滴度分别达到4.2×104和4.8×104,且能够诱导乳兔补体产生SBA活性。对两种不同来源的fHbp蛋白进行小鼠Bal B/c的口服免疫实验,结果表明两者均未诱导免疫系统产生出粘膜Ig A。小鼠攻毒试验结果表明,E-fHbp对小鼠的保护率为76.67%,A-fHbp的保护率为80%,两者在作为候选疫苗的保护效果无显著差异。本研究首次完成fHbp蛋白在转基因植物种子中的表达与分离纯化工作,并比较了两种不同来源的fHbp蛋白在免疫学方面的差异,结果表明两者无显著差异,均具备候选疫苗的潜力。本研究为植物生物反应器生产蛋白亚基疫苗提供借鉴,尤其是为B亚型脑膜炎奈瑟氏菌候选疫苗的研究和开发提供了重要理论依据。