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海葵神经毒素(seaanemoneneurotoxin)是由46-49个氨基酸残基组成的多肽,具有三个分子内二硫键。研究表明,它们能特异的结合兴奋性细胞的钠通道受体位点3,阻断或减缓钠通道的失活,延长细胞的动作电位时程。而且对不同组织的钠通道以及不同钠通道亚型作用有差异。许多海葵神经毒素能与心脏,神经和骨骼肌的钠离子通道特异性地结合,因而它们能作为研究钠通道的工具药来使用。值得注意的是,许多抗癫痫的药物(antiepilepticdrugs,AEDs)是钠通道的阻断剂,有的药物是作用于钠通道失活过程从而达到治疗的效果。鉴于海葵神经毒素的药用价值和开发前景,本论文初步探讨了重组海葵神经毒素对大鼠大脑皮层神经元钠通道的作用机制。
三种重组海葵神经毒素,即HK2a、HK7a和HK16a,具有47个氨基酸残基,来源于侧花海葵(Anthopleurinsp.)。利用生物信息学分析软件对三种新的海葵神经毒素的氨基酸序列进行分析,发现与前人报道的海葵神经毒素Ap-C和AfⅠ的同源性高,达95%。另外,三种海葵神经毒素之间也是高度同源的,只在三个氨基酸位点存在突变,它们是14、22和25位氨基酸。
本论文利用脑片膜片钳的方法研究了三种重组海葵神经毒素,即HK2a、HK7a和HK16a,对SD大鼠大脑皮层神经元钠通道的影响。研究发现,三种重组海葵神经毒素都能抑制大鼠大脑皮层神经元钠电流,而不改变钠通道最大激活电位。就它们与钠通道的结合速度而言,HK7a最快,HK2a较慢,HK16a最慢。就抑制程度而言,HK7a最强,HK16a和HK2a其次。
另一方面,HK7a既能增加钠通道的延迟时间,又能降低钠通道的最大激活电流峰值和延迟斜率;而HK2a和HK16a不改变钠通道的延迟时间,对钠通道最大激活电流峰值和延迟斜率有影响。
以上结果表明,HK7a延迟钠通道失活的过程,是大鼠大脑皮层神经元钠通道失活态阻滞剂。HK2a和HK16a不影响钠通道失活,可能作用于钠通道激活过程,是大鼠大脑皮层神经元钠通道的阻滞剂。鉴于它们对钠通道的不同作用机制,HK2a和HK16a可能是潜在的抗癫痫药物。而HK7a则可以作为研究钠通道失活的工具药来开发。
总之,研究重组海葵神经毒素对钠通道的作用机制,对于阐明它们和钠离子通道相互作用机制有重大的意义,同时也为开发钠通道工具药和抗癫痫药物提供坚实的理论基础。