目的:含酚、苯胺类废水是环境中水污染的重要来源之一,因此,对酚类和苯胺类化合物的快速检测是环境监测中一项十分重要的内容。本研究利用漆酶、酪氨酸酶和辣根过氧化物酶三种氧化酶对酚类及苯胺类化合物进行动力学特性分析,建立酚类、苯胺类化合物酶促反应的分光光度分析方法。方法:按照功能基团,拟选取13种代表性酚类和6种苯胺类化合物作为三种酶的待测底物。利用分光光度计光谱扫描进行底物筛选,确定底物吸收峰,并以分光光度法分别测定酶催化0~10 mg/L和0~1 mg/L两个不同浓度范围的酚类和苯胺类化合物的反应速率,作出底物浓度与反应速率的标准曲线。并利用漆酶筛查并检测了3种焦化废水中非挥发酚类含量。同时以双孢菇为原料,对酪氨酸酶进行了纯化分离。结果:⑴在酚类、苯胺类化合物酶促反应的分光光度分析方法中,漆酶的底物主要以多元酚、氨基酚和多元胺为主;酪氨酸酶对底物具有较强的专一性,对邻苯二酚、焦性没食子酸和2-氨基酚具有较强的催化能力;辣根过氧化物酶在底物的选择性上具有广普性,能催化氧化漆酶所不能氧化的一元胺、一元酚等化合物。利用漆酶、酪氨酸酶、辣根过氧化物酶所测定的底物浓度-反应速率的标准曲线,除漆酶测定的联苯胺外,均得到了较好的一级反应动力学线性关系,相关系数R2在0.96以上。除漆酶有部分检测物线性范围难以达到国家酚类及苯胺类排放标准,酪氨酸酶和辣根过氧化物酶检测线性范围下限均可达到国家排放标准。⑵3种废水中邻苯二酚含量分别为190.5、265.8和155.3 mg/L,回收率在91.9%~115.8%之间。⑶双孢菇经匀浆、离心、盐析、透析、DEAE-Sepharose Fastflow层析、浓缩、Sephadex G-75层析等一系列操作步骤,获得了活性较高,成分单一的酪氨酸酶。该酶催化L-DOPA的最适pH为7.0,Km值为0.182 mmol/L。结论:建立了一种多酶系统测定酚类和苯胺类化合物的分光光度法,方法操作简单,结果准确可靠,能够对含酚废水中酚类及苯胺类化合物进行定性和半定量分析,对废水中酚类及苯胺类化合物含量检测起到快速筛查作用。漆酶、酪氨酸酶和辣根过氧化物酶在底物的选择性上具有互补性和交叉性,尤其是辣根过氧化物酶可用来测定一元酚和一元胺的浓度,为多酶多通道的酶生物传感器的研制与开发提供了依据。