论文部分内容阅读
用含Ac/Ds转座元件的水稻种子为实验材料,通过低温处理和诱导培养基的筛选,诱导出高质量的胚性愈伤组织,研究植物生长调节物质配比、继代方式、干燥处理和添加物、不同再分化方法处理等对愈伤组织再分化的影响,筛选出最适的分化培养基配方,经分化培养获得一定量的再生植株(Ro),并经田间栽培收获再生植株的成熟种子(R1)。从再生植株(Ro)对叶片取样,提取基因组DNA,采用PCR方法检测Ro植株的Ac/Ds插入,并尝试采用TAIL-PCR技术扩增侧翼于Ds插入的DNA序列。以Ds侧翼序列为待查询序列,进行Ds插入位点的模拟分析.
主要结果如下:
1.培养基中添加1%甘露醇后愈伤组织的质地得到改善且增殖率明显提高;通过干燥处理、不同琼脂浓度等不同分化培养条件处理,水稻愈伤组织成苗率都有所提高。分化培养基中分别添加适量iP和Na2SiO3,也可以提高成苗率;采用三步分化法成苗率达到53%,明显优于两步分化法和直接分化法。
2.在5种基因组DNA的提取方法中,SDS法提取的基因组DNA纯度及浓度较高,较之CTAB法、简易法及脲法效果更好。
3.对获得的111株再生植株(Ro)进行了Ac/Ds检测。结果显示,有94%(105/111)的再生植株含有Ac/Ds,6%(6/111)的再生植株仅含Ac.只带有Ac而无Ds的再生植株是由于Ds切离而丢失,其具体机制目前还不清楚,有待进一步研究。因此,利用组织培养的方法获得更多的突变体来构建突变体库是可行的。
4.在实验操作的基础上,分析了可能影响TAIL-PCR反应效果的因素。