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酿酒酵母系统是最重要的外源基因表达系统之一。酿酒酵母存在高效的同源重组机制，两个DNA分子间只要有30-50bp长的同源区段就可以准确、有效地进行同源重组。本论文旨在利用同源重组技术构建两类新型酿酒酵母表达载体——不含大肠杆菌质粒序列、稳定性高的pHR系列表达载体和适合小分子多肽与人超氧化物歧化酶融合表达的载体pRSODF。为了构建不含大肠杆菌抗药性质粒序列，具有高稳定性的pHR系列表达载体，我们先在载体pHC11的基础上构建了载体pHC11R，然后以人α2b干扰素基因和乙肝病毒融合抗原基因SA28为试验基因，通过PCR扩增这两个基因的表达单元，并在它的两端引入同源重组所需的序列，将它们分别与pHC11R去除大肠杆菌质粒序列的DNA片段共转化酿酒酵母DCO4，得到表达人α2b干扰素和表达乙肝病毒融合抗原SA28的工程菌：DCO4/pHC11R-IFNα2b和DCO4/pHC11R-SA28。为了使构建的载体能适应不同类型的外源基因的表达需要，本文还进一步构建了pHR系列载体。根据人胰岛素原与人SOD融合可以在酿酒酵母中获得高效表达的文献报道，本文以我们先期构建的含有人SOD表达单元的质粒F2-hSOD为基础，建成了可以用同源重组构建小分子多肽与人SOD融合表达的载体pRSODF。在构建时还在小分子多肽与人SOD的连接区插入肠激酶识别位点，这样可以使小分子多肽能从融合蛋白中切割下来。为了验证这个载体在实际应用中的可行性，一个编码28个氨基酸的胸腺肽α1基因被用做试验基因。通过PCR扩增胸腺肽α1基因，并在其两端引入同源重组所需的序列，将其与线形化的pRSODF共转化酿酒酵母，即建成了高效表达融合蛋白SODF-Thyα1的工程菌。经发酵和纯化得到了融合蛋白SOD-Thyα1的纯品，并对融合蛋白的肠激酶切割特性进行了初步研究。