济南市黑虎泉趋磁细菌的纯培养及多样性分析

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趋磁细菌广泛分布在水体或沉积物的化学梯度变化层中,是一类能够沿着磁场方向和氧浓度梯度方向运动的革兰氏阴性细菌。趋磁细菌及其体内的磁小体在生物磁学和纳米磁性材料等方面具有十分重要的研究意义和应用价值。然而,由于趋磁细菌对生存条件非常苛刻,目前只有10余株趋磁细菌在实验室得到了纯培养。本论文以山东省济南市黑虎泉中的未培养趋磁细菌为研究对象,通过透射电镜在形态上对趋磁细菌进行了研究。结果显示,黑虎泉的趋磁细菌主要以球菌为主,螺菌,弧菌,杆菌相对较少。磁小体链有单链,双链,四条链以及多条链,还发现了一些磁小体不规则排列的趋磁细菌。在同一地点不同季节采样获得的趋磁细菌的形态差异很大,说明趋磁细菌对所处的微环境极为敏感,其群落随季节的变化而变化。通过PCR-RFLP的方法得到了13条16SrRNA基因序列,并构建了系统发育树,结果显示1条序列可能为趋磁杆菌序列,其余均为球菌序列。其中有一条序列和德国的一株未培养趋磁球菌CF23序列相似性高达99%,说明趋磁细菌种群在全世界的分布不但具有多样性,还具有相似性。趋磁细菌对环境的影响十分敏感,一些外界因素的改变可能会改变其群落结构,因此,通过改变实验室富集条件来研究趋磁细菌生态位群落结构的变化,通过这种变化来进一步推测其生存条件。本论文利用了DGGE的分子生物学方法分别研究了水中所有细菌和趋磁细菌在不同实验室富集条件下的动态变化。研究表明,趋磁细菌很可能和水中其它的一些细菌存在着共生关系,因此导致其纯培养的困难,并且温度是导致趋磁细菌种群动态变化的一个重要因素。结果显示,在16℃,pH为8.0,营养浓度适中的条件下趋磁细菌的多样性最丰富。在这些实验结果都对纯培养趋磁细菌提供了宝贵的信息。本论文还对黑虎泉的趋磁细菌纯培养进行了尝试,我们尝试了各种化学合成培养基梯度培养法,琼脂和原位沉积物制成的培养基梯度培养法,原位培养法,氧梯度培养基培养法等,还是未能得到趋磁细菌的纯培养。
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