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主要组织相容性复合体(Majorhistocompatibilitycomplex，MHC)在免疫应答中起重要作用。鸡的主要组织相容性复合体I(BF)又名B复合体，位于16号染色体，由主基因座(BF2)和次基因座(BF1)组成。鸡的B-F区的基因编码与哺乳动物同源的MHCI类分子。MHCI类分子主要负责递呈内源性抗原肽，被CD8+T细胞识别。鸡BF2基因编码的MHCI类分子α链在递呈内源性抗原中起重要作用。由于MHC在动物机体免疫系统中的重要作用而成为抗病能力的候选标记基因。MHC的特殊性质及其重要的功能，使得其在免疫遗传学、群体遗传学和抗病育种学等许多领域具有独特的效力。人和鼠等哺乳动物的MHC分子结构和功能的研究较多，而鸡的MHC分子研究相对较落后，尤其是MHCI类分子。为了对鸡的MHCI类分子的进一步研究，本试验构建稳定表达鸡MHCI类分子α基因的P815细胞株。
首先，本研究根据GenBank登录的鸡MHCIα基因全序列(GenBank登录号：AY989897)和pEGFP-N1的多克隆位点序列，设计一对引物。从鸡的外周血单核细胞抽提mRNA，作为RT-PCR扩增MHCIα基因片段的模板。通过大量PCR获得鸡MHCIα基因片段，将其插入能够表达绿色荧光蛋白的载体pEGFP-N1获得真核重组质粒pEGFP-N1-MHCIα。经过用卡那霉素的筛选，以及EcorI、SalI双酶切和PCR初步鉴定正确后，送上海生工进行测序鉴定。
其次，为了了解哺乳动物MHCIα和禽类MHCIα之间的区别和联系，我们通过生物信息学对鸡、鹌鹑、鸭、小鼠、人、牛进行序列比对和绘制进化树，结果表明禽类与哺乳类MHCIα链在进化上属于不同的分支，鹌鹑与鸡的亲缘距离最近，其次是鸭，小鼠、人、牛则为一类。进行鸡、鸭、鼠、人蛋白结构预测发现它们具有高度的结构相似性，因此我们推测它们的功能也是极为类似的。通过软件对鸡的MHCIα编码的蛋白进行细胞内定位预测，结果是蛋白分布于内膜系统。
最后，将重组质粒pEGFP-N1-MHCIα转染COS-7细胞，观察MHCIα的瞬时表达特性和细胞定位情况，经24h培养后在荧光显微镜下观察，MHCIα基因表达的鸡MHCI类分子的α链定位于内膜系统，结果和预测的一样即蛋白表达在内膜系统。通过试验确定G418工作浓度，在P815细胞密度为70％-90％时，将pEGFP-N1-MHCIα重组质粒转染到P815细胞中，然后进行筛选获得了抗600μg/mlG418的P815细胞株。经过RT-PCR的鉴定，表明MHCIα已稳定的在P815中稳定表达。经过反复冻存、复苏，传代培养。P815(pEGFP-N1-MHCIα)细胞仍保持G418抗性，RT-PCR检测阳性，表明所得到P815(pEGFP-N1-MHCIα)细胞株具有稳定性，适用于下游实验。用荧光显微镜进行观察发现P815的pEGFP-N1-MHCIα的荧光定位于细胞的内膜系统。在前人的研究基础以及预测结果和实验结果我们可确定鸡MHCIα定位于细胞的内膜系统。
本实验成功构建真核表达质粒pEGFP-N1-MHCIα，并获得了稳定表达鸡MHCIα基因的P815细胞株，为研究MHCI分子在抗肿瘤中的作用建立了细胞模型，也为进一步研究鸡的MHCI分子的结构和功能奠定基础。