论文部分内容阅读
小熊猫是国家二级重点保护野生动物，由于乱捕乱猎和生境破坏，其数量急剧减少，现存数量估计为16，000-20，000只。目前对于小熊猫的研究多集中在形态、分类、系统演化和生态学等领域，对小熊猫的遗传多样性研究较少。微卫星DNA属于共显性的遗传标记，在人、家畜研究中得到广泛应用，本文构建小熊猫的微卫星文库，筛选多态性好的座位对于小熊猫的遗传多样性进行初步的分析。在本次研究中，我们利用了链亲和素和生物素之间有强亲和的原理，构建了小熊猫的三个微卫星文库—（CAA）8，（GGA）8，（GATA）6。用PCR的方法从3个文库中筛选阳性克隆，其阳性克隆率分别为4％，4.4％，7.8％，通过测序，我们找到以下重复序列：（CAA）n3个，（GGA）n12个，（GATA）n37个，（CCA）n2个，（AC）n27个。对其进行筛选，找到较好多态性座位28个。用这28个座位对于成都大熊猫繁殖基地、郫县养殖场和云南昆明动物园的圈养小熊猫做遗传多样性分析。这28个座位在三个种群中的等位基因数分别为4～15个，2～13个，2～4个，平均每个座位的等位基因数分别为9.09个，6.69个和3.72个。熊猫基地种群表观杂合度（Ho）和期望杂合度（He）分别为0.050～0.950和0.251～0.899。郫县私人养殖场种群表观杂合度（Ho）和期望杂合度（He）分别为0.111～1和0.442～0.953。昆明动物园种群表观杂合度（Ho）和期望杂合度（He）分别为0～1和0～1。总共的平均表观杂合度（Ho）为：熊猫基地0.624643，郫县0.576964，昆明动物园0.535714。对于期望杂合度（He），总共的平均期望杂合度为：熊猫基地0.703，郫县0.757，昆明动物园0.691。28个微卫星座位的多态信息含量（PIC）最低为0.195（Aifu-5，昆明动物园），最高为0.897（Aifu-31，郫县）。根据Botstein等提出的衡量基因变异程度高低的多态信息含量指标，当PIC＞0.5时，该座位为高度多态座位，0.25＜PIC＜0.5时为中度多态座位，PIC＜0.25时为低度多态座位，说明在这28个微卫星座位中，Aifu-18，Aifu-23，Aifu-29，Aifu-35属于中度多态性位点，其余均具有高度多态性，是很好的分子遗传标记。