hrp(hypersensitive reaction and pathogenicity)基因决定着病原细菌对寄主植物的致病性和诱导非寄主植物过敏反应。在野油菜黄单胞菌致病变种(Xanthomonas campestris pv.campestris,Xcc)中,hrpG、hrpX是目前已鉴定出的控制hrp基因表达的关键调节基因,而关于hrpG、hrpX上游的调节基因几乎一无所知,因此,鉴定控制hrpG、hrpX表达的调节基因,对于研究hrp基因的表达调控机制,揭示植物病原细菌的致病机制都具有重要意义。本研究利用蔗糖敏感型自杀基因sacB作为报告基因,将报告质粒pL6sacBhrpX和pL6sacBhrpG通过三亲本接合的方法导入Xcc 8004功能注释为调节基因的253个突变体,从中筛选出6个候选调节基因XC3799、XC2253、XC3056、XC1734、XC2650和XC2251。在初步获得6个候选调节基因的基础上,本研究又利用gus基因作为报告基因,建立了GUS报告系统加以验证。首先构建获得GUS报告质粒pL6gushrpX和pL6gushrpG,然后将它们与另外两个GUS报告质粒pLGX和pLGG通过三亲本接合的方法分别导入上述候选基因对应的突变体(073G12、125H08、151D11、NK1668、PK2558和NK2168),在MMX培养基中检测GUS活性。结果显示,与野生型Xcc 8004相比,突变体073G12、125H08、151D11、NK1668和NK2168中hrpG、hrpX基因的表达量(即GUS活性)均表现为显著降低,表明这5个突变体所对应的基因XC3799、XC2253、XC3056、XC1734和XC2251正向调控hrpG、hrpX基因的表达,而突变体PK2558对应的基因XC2650非正向调控hrpG、hrpX基因的表达。通过功能反式互补,构建获得调节基因XC2253的突变体125H08和XC3056的突变体151D11的互补菌株,然后进行突变体及互补菌株的表型检测。结果表明,XC2253和XC3056这两个调节基因都可影响Xcc的致病能力,但基本上不影响Xcc诱导辣椒ECW-10R的过敏反应,也不影响Xcc胞外多糖的分泌及胞外蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶的活性;调节基因XC2253可影响Xcc的游动性及生物膜的形成,而另一调节基因XC3056不影响Xcc的游动性及生物膜的形成。