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目的明确Cyclin H/Cyclin-dependent kinase 7(CCNH/CDK7)复合物通过与CtBP2相互作用在调控食管鳞形细胞癌(Esophageal Squamous Cell Carcinoma,ESCC)细胞侵袭和迁移过程中的意义第一部分:1.在组织水平,采用免疫组化方法(Envision法)检测105例ESCC石蜡切片中CCNH、CDK7、CtBP2及上皮间质转化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)标志物E钙黏蛋白(E-cadherin)的表达,统计学分析上述指标的表达相关性,并结合临床病理资料分析CCNH、CDK7、CtBP2的表达分别与ESCC组织的病理分级、肿瘤大小、浸润深度、肿瘤转移等因素的相关性。2.结合随访资料,采用单因素和Kaplan-Meier法分析ESCC中CCNH/CDK7、CtBP2的表达与患者的预后关系,采用Cox危险比例模型多因素分析CCNH/CDK7、CtBP2与ESCC预后的关系。第二部分:1.在食管癌细胞中利用Western Blot检测CCNH/CDK7与CtBP2的表达,并利用免疫共沉淀检测上述分子的相互作用。2.在食管癌细胞株ECA109中利用干扰质粒及全长表达载体分别干预CCNH、CDK7的表达,Western Blot检测上述分子表达对CtBP2表达的影响,并利用免疫共沉淀检测干预CCNH或CDK7表达后,对其复合物与CtBP2相互作用的影响。3.在食管癌细胞株ECA109及TE-1中利用干扰质粒及全长表达质粒干预CtBP2的表达,检测其表达对细胞EMT标志物E-cadherin、N-cadherin及Vimentin蛋白水平的影响,并检测其表达对细胞侵袭、迁移能力的影响。4.在食管癌细胞株ECA109及TE-1分别干扰CCNH表达或干扰其表达后回补CtBP2,检测上述改变对食管癌细胞EMT标志物E-cadherin、N-cadherin和Vimentin表达水平的影响;并在食管癌细胞中分别过表达CCNH或过表达CCNH后干扰ctbp2表达,检测上述改变对emt标志物表达水平的影响;结合划痕实验及transwell实验验证上述干预手段对细胞侵袭、迁移能力的影响。结果1.免疫组化结果显示,ccnh、cdk7和ctbp2在正常食管组织中低表达,在食管鳞癌组织中高表达,其阳性表达率与肿瘤组织的病理学分级(p=0.000)﹑淋巴结转移状况(p=0.005)正相关。相关性分析显示,食管鳞癌组织中ccnh、cdk7和ctbp2表达水平与emt指标e-cadherin的表达水平正相关(p=0.004),差异有统计学意义。kaplan-meier分析显示,escc组织中ccnh、cdk7、ctbp2高表达的病例,其生存率显著低于上述分子低表达的病例,差异有统计学意义。单因素分析表明ccnh、cdk7及ctbp2的表达水平与escc患者的不良预后有关(p=0.010)。cox危险比例模型分析显示ccnh、cdk7及ctbp2可做为escc预后的独立指标(p=0.005)。2.免疫组化结果显示食管癌细胞中ccnh/cdk7复合物与ctbp2存在着相关性。在食管癌细胞中,通过内源性免疫共沉淀和外源性免疫共沉淀进一步验证上述的相互作用。3.在食管癌细胞中转染过表达ctbp2质粒,westernblot方法和免疫荧光结果显示转载ctbp2过表达可以导致e-cadherin水平表达下降;在食管癌细胞中转染干扰性ctbp2质粒,e-cadherin蛋白水平较对照组显著增加。划痕实验结果表明,ctbp2高表达的escc细胞其迁移能力明显强于对照组细胞,而ctbp2低表达的escc细胞其迁移能力低于对照组细胞。transwell实验得到了同样的结果4.在食管癌细胞中转染干扰性ccnh质粒,westernblot方法和免疫荧光结果显示e-cadherin蛋白表达水平较空白对照组增加;在干扰ccnh表达后回补ctbp2过表达质粒,则一定程度上抑制了e-cadherin水平的上调;食管癌细胞中过表达ccnh质粒,e-cadherin蛋白表达水平较对照组减少,而过表达ccnh后再导入ctbp2干扰性质粒,则可以上调e-cadherin蛋白表达水平。上述实验结果提示ccnh可通过与ctbp2的作用促进食管癌细胞emt的进程,划痕实验和transwell实验结果也进一步验证了上述结论。结论1.在组织学水平发现CCNH/CDK7、CtBP2在食管癌组织中高表达,与ESCC患者的不良预后有密切关系,提示CCNH/CDK7、CtBP2可能与ESCC的发生发展密切相关,可作为ESCC预后的指标之一。2.明确了CCNH/CDK7与CtBP2在食管癌细胞中存在协同作用,CCNH/CDK7在ESCC细胞中可正向调节CtBP2的表达水平。3.CtBP2促进食管癌细胞的迁移过程。CCNH/CDK7复合物通过上调CtBP2的表达促进食管癌细胞的迁移过程。CCNH/CDK7-CtBP2-EMT有望成为ESCC的临床监测指标及潜在治疗靶点。