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本论文利用HPLC-DPPH-MS在线筛选抗氧化活性物质的方法,将HPLC的快速分离技术和DPPH对抗氧化物的快速检测技术相结合,采用响应面法优化了在线筛选抗氧化活性物质的系统参数,建立了一套集HPLC分离、DPPH在线抗氧化筛选和MS鉴定为一体的HPLC-DPPH-MS的在线抗氧化物质的筛选方法,综合分析并筛选中藏药植物中的抗氧化活性物质。本方法与传统的抗氧化筛选方法相比具有操作简便、快速、高效等优势,可直接从中藏药植物中得知其中抗氧化活性物质的信息。应用此方法对大花龙胆、黄花补血草和康定鼠尾草中抗氧化活性成分进行了在线筛选。主要研究成果和结论如下: 1.在单因素实验的基础上,选择DPPH溶液浓度、DPPH溶液流速、反应环长度3个因素为自变量,以黄酮类化合物芦丁的负峰信噪比作为响应值,采用3因素3水平的响应面分析法,得到在线筛选抗氧化活性物质的最优参数为:DPPH溶液浓度为25μg/mL,DPPH溶液流速为0.45mL/min,反应环长度为15m。在最优的筛选参数下,利用维生素E、表儿茶素、异荭草素、金丝桃苷、槲皮素和槲皮苷这几种具有抗氧化活性的化合物对在线筛选系统的适用性进行验证。结果表明,HPLC-DPPH-MS在线筛选抗氧化活性物质系统能够快速筛选出具有抗氧化活性的化合物。 2.在对大花龙胆总黄酮含量和抗氧化能力测定的基础上,利用在线筛选系统从大花龙胆花提取物中筛选得到5种具有抗氧化活性的化合物。采用大孔树脂富集结合半制备色谱从大花龙胆花中分离纯化得到3种单体化合物,经1H-NMR和13C-NMR等波谱学数据分析鉴定为:乌奴龙胆苷E、大花龙胆苷A、和乌奴龙胆苷A。这3种化合物均为从大花龙胆中首次分离得到,其中大花龙胆苷A为新化合物。利用DPPH自由基清除法对这三种化合物、维生素C和BHT的抗氧化能力进行测定,得到IC50值分别为7.19、10.63、8.26、5.08、12.82μg/mL,抗氧化能力大小排序为:维生素C>乌奴龙胆苷E>乌奴龙胆苷A>大花龙胆苷A>BHT。 3.在对黄花补血草总黄酮含量和抗氧化能力测定的基础上,采用在线筛选系统从其提取物中筛选得到7种具有抗氧化活性的化合物。经HPLC/MS和相关文献分析,分别为:杨梅酮-3-O-β-D-(6"-O-没食子酰基)-吡喃葡萄糖苷、杨梅素-3-O-葡萄糖苷、杨梅苷、圣草素-7-O-葡萄糖苷、杨梅酮、圣草素、高圣草素。 4.采用在线筛选系统从康定鼠尾草根提取物中筛选得到3种具有抗氧化活性的化合物。经HPLC/MS和相关文献分析,分别为:咖啡酸、异迷迭香酸苷和迷迭香酸。建立了HPLC法测定康定鼠尾草中咖啡酸、异迷迭香酸苷和迷迭香酸的方法。以Diamonsil-C18(2)柱为分析柱,0.5%冰乙酸-甲醇为流动相,梯度洗脱,柱温为25℃,流速为1.0mL/min,检测波长为280nm。运用该方法测定康定鼠尾草样品中3个化合物的含量分别为:0.254、1.401、8.104mg/g。