七氟醚对人神经母细胞瘤细胞铁代谢的影响及分子机制研究

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目的:本研究拟评价七氟醚对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)铁代谢的影响及其作用机制。方法:选取SH-SY5Y细胞作为实验材料,将其分为4组:对照组(N组)、七氟醚组(S组)、JAK2抑制剂AG490组(A组)、AG490+七氟醚组(A+S组)。N组细胞在CO2培养箱中培养6h;S组细胞在持续给予2.0%七氟醚的CO2培养箱中培养6h;A组细胞加入50μM AG490并在CO2培养箱中培养6h;A+S组细胞加入50μM AG490并在持续给予2.0%七氟醚的CO2培养箱中培养6h。处理结束24h后,分别提取4组细胞的蛋白质和RNA,采用Western Blot法检测膜铁转运蛋白1(FPN1)、轻链铁蛋白(FTL)以及Janus激酶2(JAK2)、信号转导转录激活因子3(STAT3)、磷酸化Janus激酶2(p-JAK2)、磷酸化信号转导转录激活因子3(p-STAT3)的表达水平。采用Real-time PCR获得各组细胞铁调素(hepcidin)m RNA的表达水平;采用SPSS 21.0软件进行统计学分析,正态分布的计量资料以均数±标准差(x±s)表示,组间比较采用单因素方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。结果:1、Western Blot结果显示:与N组相比,S组FPN1、FTL蛋白及p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值升高(P<0.05);A组FPN1、FTL蛋白及p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值差异无统计学意义(P>0.05)。与S组相比,A+S组FPN1、FTL蛋白及p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值降低(P<0.05)。2、Real-time PCR结果显示:与N组相比,S组hepcidin表达升高(P<0.05),A组hepcidin表达差异无统计学意义(P>0.05)。与S组相比,A+S组hepcidin表达降低(P<0.05)。结论:七氟醚通过激活JAK2/STAT3细胞通路,导致SH-SY5Y细胞内铁增多。
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