荧光显微镜是光学显微镜的一种,是免疫荧光细胞化学的基本工具。它的主要作用是研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布和定位等,在分子遗传学、细胞生物学、医学诊断学和药物筛选等领域得到广泛应用。但是,荧光显微镜在使用过程中会出现元件老化,光路不稳定等问题,降低了仪器的性能,造成检测数据的不准确,所以需要对仪器进行日常校准;同时由于荧光测量方法属于相对测量,同一样品在不同仪器上检测得到的荧光强度会不同,导致仪器间数据没有可比性,所以需要对仪器与仪器之间进行校准。目前,许多国外科研机构已经通过使用标准物质的校准方法对这类仪器进行量值溯源研究,其中标准物质校准法主要分为荧光标准物质校准法和荧光校准玻片校准法。但是现在我们国内的科研机构很少从事相关的工作,虽对荧光标准物质校准法有一定的研究,但是对荧光校准玻片校准法的研究甚少。在此环境下,本文基于荧光校准玻片校准法对荧光显微镜进行校准研究,制定了校准方法并研制出荧光校准玻片。本文的主体内容分为三个部分:（1）本文首先根据荧光校准玻片校准法,为了对荧光显微镜的荧光光路的均匀性进行校准研究,分别用检测装置对校准玻片进行荧光强度检测和Image J软件对荧光图像进行荧光强度分析,将二者的结果进行比对分析,从而确定了校准方法。（2）根据校准方法设计并制作了校准玻片,同时校准玻片的最小分辨率为4μm。（3）使用校准玻片对校准方法进行验证分析,同时对校准玻片进行功能验证。通过研究和实验结果证明,本文针对荧光显微镜提出的校准方法能够满足荧光显微镜荧光光路的校准要求,荧光强度和浓度的相关系数为0.9989,检测精度高;设计的荧光校准玻片部分区域均匀性良好,可以选择均匀区域对荧光显微镜进行校准;同时短期稳定性良好,可以以分钟为间隔的显微镜Image J数据来表现校准过程的稳定性,满足校准功能。