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1 目的 通过整体及离体实验,探讨扶正抑瘤颗粒(FYK)诱导 H22瘤细胞凋亡的分子调控机制。 2 方法 整体实验:观察扶正抑瘤颗粒(FYK)全方及拆方诱导 H22瘤细胞凋亡及其机制。接种 H22瘤细胞的昆明种小鼠随机分为 8 组:扶正组、抑瘤组、FYK 大剂量组、FYK 中剂量组、FYK 小剂量组、天仙胶囊组、环磷酰胺组、模型组和空白对照组。等体积灌胃给药,原位末端标记法(TUNEL 法)检测瘤细胞凋亡,免疫组织化学方法检测瘤组织中 Bax、Bcl-2 及 Caspase-3 的蛋白表达,电镜观察肿瘤细胞的形态学变化。 离体实验:扶正抑瘤颗粒(FYK)全方分为空白组、FYK 大、中、小剂量组和天仙组共 5 组,制备中药含药血清并作用体外培养的 H22细胞。台盼兰染色计数法观察活细胞数量变化并绘制细胞生长曲线;MTT 法检测体外培养细胞的生长抑制率;流式细胞术检测细胞增殖周期;流式细胞术和原位末端标记(TUNEL)等方法检测细胞凋亡;免疫细胞化学 SABC 法观察凋亡相关蛋白 Bcl-2 和 Bax、P53 以及 Fas、FasL 和 Caspase-3的表达;激光共聚焦显微镜检测细胞内[Ca2+]的变化。 3 结果 整体实验结果: (1)FYK 全方的抑瘤效果显著高于拆方组(P<0.05); (2)FYK 显著诱导瘤细胞凋亡,增强巨噬细胞的吞噬能力; (3)FYK 显著激活 bax, caspases 基因,上调相应促凋亡蛋白(Bax,Caspase-3)的表达,同时下调抑制凋亡的 Bcl-2 蛋白表达。 离体实验结果: (1)FYK 不同剂量组含药血清对 H22细胞的增殖活力有显著的抑制作用,与相应对照组比较有显著性差异(P<0.05);FYK 大、中、小剂量组对细胞的增殖抑制率分别为 79.3%,54.6%,31.3%,剂量越大,其对 H22细胞的抑制作用越明显,细胞抑制率越高,其抑制率与 FYK 剂量呈正相关; (2)流式细胞术结果表明,FYK 含药血清增加 G0/G1期细胞,减少 S 期细胞和 G2/M期细胞,细胞增殖指数(PI)降低,尤以中、大剂量组变化最为明显(P<0.05); (3)TUNEL 法检测,FYK 含药血清显著增加 H22细胞的凋亡率,流式细胞术检测,FYK 作用 72h 后,各用药组的 G0/G1期前出现凋亡峰,且存在量效、时效关系,用药剂量越大、作用时间越长,细胞凋亡率越高;各剂量组可见细胞 G0/G1期增多,S 期细胞和 G2/M 期细胞减少,尤以中、大剂量组变化为显著(P <0.01);