【摘 要】
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CD20分子是以非糖基化形式存在于B淋巴细胞表面的特异性膜蛋白,该抗原表达于B淋巴细胞中,但是在造血干细胞、浆细胞中不表达。CD20分子在治疗B细胞淋巴瘤中起着重要作用,其原因是与抗体结合不会发生抗原调变不仅如此也不会发生显著内化和脱落。本试验首先使用人CD20胞外区多肽免疫成年双峰驼,将获得的CD20特异性单域抗体基因转化到大肠杆菌TG1中,从而构建噬菌体抗体库。用商品化的人CD20蛋白对其进行
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CD20分子是以非糖基化形式存在于B淋巴细胞表面的特异性膜蛋白,该抗原表达于B淋巴细胞中,但是在造血干细胞、浆细胞中不表达。CD20分子在治疗B细胞淋巴瘤中起着重要作用,其原因是与抗体结合不会发生抗原调变不仅如此也不会发生显著内化和脱落。本试验首先使用人CD20胞外区多肽免疫成年双峰驼,将获得的CD20特异性单域抗体基因转化到大肠杆菌TG1中,从而构建噬菌体抗体库。用商品化的人CD20蛋白对其进行三轮的富集与筛选,经过Phage ELISA鉴定选出与人CD20胞外区多肽有高结合活性的重组噬菌体。将阳性克隆基因连接至原核表达载体p ET-25b-SBP,采用低温诱导,进行可溶性表达。得到可溶性的抗CD20特异性单域抗体,经ELISA和Western blot鉴定其亲和活性。并对CD20特异性单域抗体进行了细胞免疫荧光（Cellular immunofluorescence）试验的研究,证明其在真核细胞中也可以很好的结合。以下为试验研究结果:（1）以CD20蛋白为抗原免疫骆驼后测得血清抗体效价为1:32000,并成功建立CD20噬菌体抗体库,其抗体库库容为1.2×10~8,重组率为91.7%,经过筛选得到54株阳性重组噬菌体。（2）成功得到6个不同序列的VHH,将这6株单域抗体的质粒克隆至原核表达载体中,表达并纯化CD20单域抗体。ELISA和Western-blot结果显示纯化后的单域抗体和CD20抗原有一定较高的结合活力。细胞免疫荧光试验证实单域抗体和细胞表面的CD20抗原结合。本实验为单域抗体开发提供了更好的基础,对B细胞淋巴瘤的免疫治疗可发挥一定的作用。
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