麦长管蚜嗅觉相关蛋白Gqα基因的克隆及真核表达

来源 :中国农业科学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xixicoco606
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蚜虫通过直接取食及传播病毒病造成危害,是温带农作物的主要害虫,是农业重大害虫之一。研究表明,昆虫的嗅觉在处理来自环境的化学信号过程中起着非常重要的作用,从而使昆虫能够成功地进行寄主定位,寻找配偶、产卵场所等。深入了解蚜虫嗅觉行为,可为研制高效的引诱剂或杀虫剂提供理论依据,具有重要的理论和实际意义。本研究结合RT-PCR及RACE技术扩增编码麦长管蚜嗅觉相关Gqα蛋白的cDNA序列,分析该基因的结构特征;并通过构建昆虫杆状病毒表达载体对该基因进行真核表达。取得如下研究结果:首次克隆麦长管蚜Gqα全长cDNA序列。根据已报道的动物嗅觉相关蛋白Gqα的氨基酸序列保守区设计简并引物,以麦长管蚜(Sitobion avenae)有翅成蚜cDNA为模板,结合RT-PCR及RACE技术扩增编码麦长管蚜Gqα蛋白的cDNA序列,其cDNA序列开放阅读框长为1062bp,编码352个氨基酸,预测蛋白分子量为40.8kDa,与GenBank多个物种Gqα的cDNA序列及氨基酸序列均有很高相似性(≥82.17%),并具有Gα亚基q类蛋白的典型特征(GenBank核酸序列登录号:EF638906,氨基酸序列登陆号:ABR37295)。利用TOPO及Gateway技术,通过重组反应,构建苜蓿丫纹夜蛾核型多角体杆状病毒(Autographa californica nuclear polyhedrosis virus, AcMNPV)重组病毒。将N端插入了V5-His6标记的V5-His6Gqα序列整合到AcMNPV病毒基因组DNA中,得到具有独立转染活性的重组杆状病毒。转染粉纹夜蛾离体细胞系Tn(Trichoplusia ni)进行Gqα蛋白的真核表达。SDS-PAGE检测到预期分子量约42kDa的蛋白带,Western-blotting检测到表达产物。表明含有6个组氨酸标签及V5抗原位点的Gqα融合蛋白V5-His6Gqα在昆虫离体细胞系中成功表达。本研究为进一步研究蚜虫G蛋白的功能及其信号传导途径奠定了基础,对今后深入开展昆虫与寄主植物互作机理及植物抗虫机制的研究,开辟防治新途径具有重要的理论和实践意义。
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